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貨號	FS-X9539

英文名稱：Caspase 1 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|100次

貨號：FS-X9539

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是采用分光光度法檢測細(xì)胞或組織裂解液中caspase 1酶活性或純化的caspase 1酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時(shí)，除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測20個(gè)樣品。

試劑盒組分：

裂解液——————8ml

檢測緩沖液——————8ml

Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也稱interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有時(shí)被寫作caspase-1或caspase 1，是caspase家族中可以剪切IL-1b前體蛋白或IL-18前體產(chǎn)生相應(yīng)成熟的細(xì)胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前體蛋白，產(chǎn)生20kD和10kD的片段，這兩個(gè)片段可以形成異源二聚體(heterodimer)，并進(jìn)一步由兩個(gè)異源二聚體形成四聚體。Caspase 1可以通過剪切其凋亡Bcl-XL來調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，并通過其對一些細(xì)胞因子前體的剪切來調(diào)控相關(guān)免疫反應(yīng)。

本caspase 1活性檢測試劑盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 1的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。

試劑盒中提供了caspase 1催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 1酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。

儲存條件：-20℃。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中性內(nèi)肽mei/腦啡肽mei(NEP)elisa檢測試劑盒英文名稱：NEP ELISA Kit，NEP，

原纖維蛋白-1(FBN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：FBN1 ELISA Kit，F(xiàn)BN1，

整合suα2(ITGA2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ITGA2 ELISA Kit，ITGA2，

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)elisa檢測試劑盒英文名稱：hnRNP A3 ELISA Kit，hnRNP A3，

胰島su樣生長因子結(jié)合蛋1(IGFBP-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：IGFBP-1 ELISA Kit，IGFBP-1，

血小板因子3(PF-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：PF-3 ELISA Kit，PF-3，

血漿酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)elisa檢測試劑盒英文名稱：CETP ELISA Kit，CETP，

血管緊張肽meiA(ATA)elisa檢測試劑盒英文名稱：ATA ELISA Kit，ATA，

信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)elisa檢測試劑盒英文名稱：STAT3 ELISA Kit，STAT3，

纖維蛋白原α鏈(FGA)elisa檢測試劑盒英文名稱：FGA ELISA Kit，F(xiàn)GA，

細(xì)胞角蛋白13(CK-13)elisa檢測試劑盒英文名稱：CK-13 ELISA Kit，CK-13，

Nicalin蛋白(NCLN)elisa檢測試劑盒英文名稱：NCLN ELISA Kit，NCLN，

Ki-67蛋白(Ki67P)elisa檢測試劑盒英文名稱：Ki67P ELISA Kit，Ki67P，

Mg2+/Mn2+依賴性蛋白磷suanmei1A(PPM1A)elisa檢測試劑盒英文名稱：PPM1A ELISA Kit，PPM1A，

G蛋白偶聯(lián)受體78(GPR78)elisa檢測試劑盒英文名稱：GPR78 ELISA Kit，GPR78，

ER脂質(zhì)Raft關(guān)聯(lián)蛋白1(ERLIN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：ERLIN1 ELISA Kit，ERLIN1，

C-型凝集su域家族4成員K(CLEC4K)elisa檢測試劑盒英文名稱：CLEC4K ELISA Kit，CLEC4K，
Caspase 1 活性檢測試劑盒奧美拉zuo相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：

蒿jia醚相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：

琥酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Artesunate

2-叔丁基-4-羥基茴香醚標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：2-tert-Butyl-4-hydroxyanisole

普羅帕tong相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Propafenone Related Compound B

鄰jiaben磺酰an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：o-Toluenesulfonamide

辛基三嗪tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Ethylhexyl Triazone

木糖chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Xylitol

肌chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Inositol

塔格糖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Tagatose

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