細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠白血病細(xì)胞    

產(chǎn)品英文：P388

貨號(hào)：FS-01X9686

細(xì)胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：懸浮生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

注意事項(xiàng)：

人膠原吡啶交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒 Human Pyridinoline crosslinks,PYD ELISA Kit

人葡萄球菌蛋白A(SPA)ELISA試劑盒 Human Staphylococal protein A,SPA ELISA Kit

人刀豆A(ConA)ELISA試劑盒 Human concanavalin A,ConA ELISA Kit

人游離原卟啉(FEP)ELISA試劑盒 Human Free erythrocyte proloporphyrin,FEP ELISA Kit

人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 Human lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Kit

人過氧化(GSH-Px)ELISA試劑盒 Human Glutathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit

人結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA試劑盒Human Retinol binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit

人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)ELISA試劑盒Human proteolipid protein,PLP ELISA Kit

人垂草扁桃(VMA) ELISA試劑盒Human vanillylmandelic acid,VMA ELISA Kit

人葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒Human glucokinase regulatory protein,GKRP ELISA Kit

人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISA試劑盒Human CTX-2 ELISA Kit

人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒Human Calretinin,CR ELISA Kit

人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒Human Bone Morphogenetic Protein 6,BMP-6 ELISA Kit

人脂肪結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒 Human fatty acid-binding protein,FABP ELISA Kit

人腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)ELISA試劑盒 Human ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1 ELISA Kit

人羥糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein,HRGP ELISA Kit

人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒Human Glucose transporter 1,GLUT1 ELISA Kit

人花生四烯(AA)ELISA試劑盒Human Arachidonic Acid,AA ELISA Kit

人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒Human bone sialoprotein,BSP ELISA Kit
小鼠白血病細(xì)胞ADNP/NAP  活性依賴的神經(jīng)保護(hù)抗體規(guī)格: 0.1ml

Cphospho-C CBL(Tyr700)  磷化原癌基因CBL2抗體規(guī)格: 0.1ml

ADORA3  腺受體A3抗體規(guī)格: 0.1ml

ADO  2-基乙硫雙加氧抗體規(guī)格: 0.2ml

Integrin Alpha V  整合αV抗體規(guī)格: 0.2ml

CPI17 alpha  蛋白磷激PKC/CPI-17抗體規(guī)格: 0.1ml

phospho-CPI17 alpha (Thr38)   磷化蛋白磷激PKC/CPI-17抗體規(guī)格: 0.1ml

ADRA2  ADRA2腎上腺能受體2抗體規(guī)格: 0.1ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。