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Brdu細胞增殖檢測試劑盒(IHC法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 11:38:58瀏覽次數:167次

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貨號 FS-X9597
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產品介紹:

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測活組織中再生的細胞。BrdU 可以摻合到復制細胞中新的合成DNA 中(在細胞周期S 期),在DNA 復制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測這個插入的化學品,從而檢測出細胞是否在復制其DNA。本試劑盒細胞增殖檢測通過檢測BrdU 的摻合程度,監測細胞健康程度,估量DNA 合成從而監測細胞分裂。

中文名稱:Brdu細胞增殖檢測試劑盒(IHC法)

英文名稱:BrdU cell proliferation Detection Kit(IHC)

產品規格:50T

貨號:FS-X9597

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

Misato同源物1(MSTO1)檢測試劑盒  forMisatoHomolog1(MSTO1)    

帕金森氏病蛋白2(PARK2)檢測試劑盒  forParkinsonDiseaseProtein2(PARK2)    

能受體α1A(ADRα1A)檢測試劑盒  forAdrenergicReceptorAlpha1A(ADRa1A)    

RhoGDP解離抑制因子α(ARHGDIα)檢測試劑盒  forRhoGDPDissociationInhibitorAlpha(ARHGDIa)    

免疫球蛋白G(IgG)檢測試劑盒  forImmunoglobulinG(IgG)    

Rab親和蛋白3A(RPH3A)檢測試劑盒  forRabphilin3A(RPH3A)    

叢狀蛋白A3(PLXNA3)檢測試劑盒  forPlexinA3(PLXNA3)    

促性腺激su釋放激su(GnRH)檢測試劑盒  forGonadotropinReleasingHormone(GnRH)    

白介su1β(IL1β)檢測試劑盒  forInterleukin1Beta(IL1b)    

生長分化因子5(GDF5)檢測試劑盒  forGrowthDifferentiationFactor5(GDF5)    

野鼠色基因相關蛋白(AGRP)檢測試劑盒  forAgoutiRelatedProtein(AGRP)    

細胞間粘附分子3(ICAM3)檢測試劑盒  forIntercellularAdhesionMolecule3(ICAM3)    

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血小板反應蛋白(THBS1)檢測試劑盒  forThrombospondin1(THBS1)    

組織因子(TF)檢測試劑盒  forTissueFactor(TF)    
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咪達zuo侖標準品  規格:300mg  英文名稱:Midazolam CIV

an喹喔啉標準品  規格:200mg  英文名稱:Sulfaquinoxaline

馬來suan吡拉明標準品  規格:200mg  英文名稱:Pyrilamine Maleate

suan標準品  規格:500mg  英文名稱:

阿昔韋標準品  規格:300mg  英文名稱:Acyclovir

二類殘留溶劑-jia氧丁基tong標準品  規格:1.2ml×3ampules  英文名稱:

間氨基ben酚標準品  規格:300mg  英文名稱:m-Aminophenol

mi索前列chun標準品  規格:100mg  英文名稱:Misoprostol

lv貝標準品  規格:200mg  英文名稱:Bethanechol Chloride

 


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