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堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:04:13瀏覽次數:176次

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貨號 FS-X10009
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中文名稱:堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)

英文名稱:

產品規格:3×50ml|3×100ml

貨號:FS-X10009

產品介紹:

用途:

堿性磷酸酶染色,適用于石蠟切片

注意事項:

屬于金屬沉淀法,堿性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出現假陽性,采用陰性對照。二甲苯應采用AR以上級別。

儲存條件:4℃,避光,6個月

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

楊奇青霉1號染色體開放閱讀框84抗體Human NPYR5(Neuropeptide Y Receptor Y5) 人腎上腺髓質(ADM)免疫試劑盒

沙諾氏芽孢桿菌E3泛蛋白連接CHIP蛋白抗體Human NRG-3(Neuregulin 3) 人腎上腺能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒

幼角鐮孢肉堿O-乙酰基轉移Human OVA sIgE(Ovalbumin Specific IgE) 人腎上腺(EPI)免疫試劑盒

黑色附球霉5號染色體開放閱讀框45抗體Human OVA sIgG(Ovalbumin Specific IgG) 人腎上腺皮質抗體(ACA)免疫試劑盒

大腸埃希菌5號染色體開放閱讀框48抗體Human OXA(Orexin A) 人蛋白(nephrin)免疫試劑盒

雅致枝霉6號染色體開放閱讀框136抗體Human NRG-4(Neuregulin 4) 人腎(RNLS/MAO-C)免疫試劑盒

谷棒桿菌6號染色體開放閱讀框138抗體Human PCIII(Procollagen III) 人神經軸突絲蛋白(NAFP)自身抗體免疫試劑盒

季也蒙邁耶氏酵母6號染色體開放閱讀框145抗體Human PCI(Protein C Inhibitor) 人神經元凋亡抑制蛋白(NAIP)免疫試劑盒

大孔菌CD39抗體Human PDIA5(Protein Disulfide Isomerase A5) 人神經營養因子3(NT-3)免疫試劑盒

嗜麥芽寡養單胞菌6號染色體開放閱讀框106抗體Human PDIA6(Protein Disulfide Isomerase A6) 人神經型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒

黃色糖多孢菌6號染色體開放閱讀框115抗體Human PDK4(Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) 人神經粘著分子(NRCAM)免疫試劑盒

居真菌細菌屬6號染色體開放閱讀框123抗體Human PCNA(ProlifeRating Cell Nuclear Antigen) 人神經粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)免疫試劑盒

少根根霉6號染色體開放閱讀框129抗體Human PDP(Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase) 人神經特異性烯化(NSE)免疫試劑盒

纖維單胞菌6號染色體開放閱讀框129抗體Human NT-ProANP(N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide) 人神經肽Nesfatin-1 免疫試劑盒

金黃桿菌6號染色體開放閱讀框132抗體Human PEX2(Peroxisomal Biogenesis Factor 2) 人神經絲蛋白M(NF-M)免疫試劑盒

孔狀短小莖點霉磷化鈣調磷B亞基B1抗體Human PCPE1(Procollagen C Proteinase Enhancer 1) 人神經絲蛋白L(NF-L)免疫試劑盒

海桿菌Marinobacter│sp. 質量規格:>98%,BRCD147分子試劑盒大黃葡萄糖

小盾殼霉Coniothyrium│minitans 質量規格:>99%,標準品CD146分子試劑盒

: NRRLB-12526資源名稱: 運動發酵單胞菌 質量規格:>98%,BRCD134分子試劑盒多舌飛蓬
堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)青霉 2,2-雙(2-羥基-5-聯苯基)烷Enah;Vasp樣蛋白

土曲霉 (S)-(+)-3(芐氧羰基)-5-氧代-4-惡唑啉乙去乙酰化Sirtuin-2

腸膜明串珠 甲基(三苯基膦)金(I)腺環化8

芽孢桿屬 (R)-(+)-2-(二苯甲基)吡咯烷基質金屬蛋白15

蒙氏假單胞 9-UndecynoicAcid基質金屬蛋白16

玉龍小單孢 4-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-3-buten-2-ol抗IgG抗體

大豆慢生根瘤 N,N-二乙基對苯胞尿鳥結合蛋白

枯草芽胞桿 1S,2S)-(+)-[1,2-Cyclohexanediamino-N,N'-bis(3,5-di核糖體蛋白S19

綠粘帚霉 2-氨基辛異亮氨基

哈茨木霉 三水埃索美拉唑鎂SCD62P

滑菇 3,3,3-三(對)細小病IgG抗體

毛木耳 3-硫-異硫脲基磺細小病IgM抗體

釀酒酵母 2-甲氧基-4-磺酰8羥基脫氧鳥抗體

類阿達青霉 a-葡糖-a-葡糖4-羥基壬烯

根瘤 二[(R)-(+)-2,2′-二(二苯基膦)-1,1′-聯萘基][(1R,2R)-(+)-1,2-芳香化

 


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