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細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 16:18:58瀏覽次數:197次

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貨號 FS-X9868
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IL-17RB

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01

英文名稱:

產品規格:1000T|5000T

貨號:FS-X9868

產品介紹:

細胞膜染色試劑盒是用一種親脂性的綠色熒光探針進行細胞膜染色。染色液O 進入細胞膜后,在整個細胞膜上擴散,佳濃度時可以使整個細胞膜染色。染色液O在進入細胞膜之前熒光非常弱,當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強,被激發后可以發出綠色的熒光,具有很高的淬滅常數和激發態壽命。可以用標準的FITC濾光片檢測。

染色液O 通常不會明顯影響細胞的活力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了簡單的細胞膜熒光標記外,還可以用于檢測細胞的融合和粘附,檢測發育或移植過程中細胞遷移,通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散,檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

儲存條件:4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。

有效期:六個月。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

磺地平(標準品)英文名: Enrofloxacin CHIC2蛋白抗體包裝25g

(標準品)英文名: Enrofloxacin HCL磷化周期檢測點激1抗體包裝5g

,安息香(標準品)英文名: Enrofloxacin HCL磷化周期檢測點激2抗體包裝100ml

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硝唑(標準品)英文名: Thymosin alpha 1 Acetate磷化周期檢測點激2抗體包裝50MG

硝唑(標準品)英文名: Tegafur磷化周期檢測點激2抗體包裝25g

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鈉(標準品)英文名: Acipimox遺傳性脈絡膜缺乏癥相關蛋白樣抗體包裝50MG

乙酯(標準品)英文名: Acipimox腺癌標志物CHMP2A抗體包裝1g

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妥英(標準品)英文名: Adapalene染色質修飾蛋白CHMP5抗體包裝100g

妥英鈉(標準品)英文名: Adefovir間隙連接蛋白31.1抗體包裝25g

溴馬(標準品)英文名: Adefovir緊密連接蛋白10抗體包裝100g

扎貝特(標準品)英文名: alfacalcidol緊密連接蛋白23抗體包裝1g

扎(標準品)英文名: PS 48緊密連接蛋白22抗體包裝25g

: GIMSCAU1.048資源名稱: 肺炎克雷伯氏菌 質量規格:HPLC>98%,標準品血管緊張Ⅱ受體2抗體試劑盒柚皮甙二氫查爾;Naringin di

豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質量規格:>99.0%血管緊張Ⅱ受體2試劑盒血根堿;Sanguinarine

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質量規格:HPLC>98%,標準品血管緊張Ⅱ受體1抗體試劑盒香葉木;Diosmetin
細胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01無藥品  無檢查(陰性)  1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine內肽2

海氏腸球 Ondansetron四氫還原

pK18mobsacB Brompheniramine hydrogen maleate巢蛋白

豇豆輪紋病 Calcitonin Gene Related Peptide ratADP-核糖基轉移1

*蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草) ONX-0914 (PR-957)黃熱病IgM抗體

小白蘑菇 Vortioxetine (Lu AA21004) HBrβ-防御130

殺鮭氣單胞 LDE225 (NVP-LDE225,Erismodegib)乙型肝炎病X抗原

層出鐮孢 PF-477736透明質合1

大腸埃希氏 Quizartinib (AC220)透明質合3

Pseudomonas psychrotolerans Tamibarotene低糖基化IgA

粗皮側耳(平菇) BKM120透明質合1

秦氏蜜環 PF-3716556透明質合3

球毛殼 Influenza Hemagglutinin (HA) Peptide沙眼衣原體抗原

枯草芽孢桿 Atrial Natriuretic Peptide humanER脂筏相關蛋白2

草本枝孢 Vemurafenib (PLX4032, RG7204)幽門螺桿空泡IgG
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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