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貨號 | FS-X9576 |
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產品介紹:
本試劑盒適用于培養細胞及新鮮組織caspase-6 檢測。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-6 是級聯酶的下游分子,被Caspase-9 激活后,激活下游Larmin A 的活性,導致細胞形態發生皺縮及細胞膜滲漏。Caspase-6 在正常狀態下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細胞發生凋亡階段時則被激活。Caspase-6 分光光度法檢測試劑盒就是將caspase-6 序列特異性的多肽偶聯至發色基團,當該底物被caspase-6 剪切后,發色基團即游離出來,可通過酶標儀或分光光度計(λ=405nm 或400nm)測定其吸光值,可考察caspase-6 的活化程度。 注意事項 1. Caspase-6 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-6 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-6 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-6 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關,如測定的OD 值偏低,可通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
中文名稱:Caspase 6分光光度法檢測試劑盒
英文名稱:Caspase-6 Colorimetric Assay Kit
產品規格:20T|50T|100T
貨號:FS-X9576
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
銜接因子相關蛋白復合體2μ1(AP2μ1)檢測試劑盒 forAdaptorRelatedProteinComplex2Mu1(AP2m1)
腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)檢測試劑盒 forTumorNecrosisFactorLigandSuperfamily,Member13(TNFSF13)
轉化生長因子β誘導蛋白(TGFβI)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBetaInducedProtein(TGFbI)
封閉蛋白11(CLDN11)檢測試劑盒 forClaudin11(CLDN11)
生長調節致癌基因γ(GROγ)檢測試劑盒 forGrowthRegulatedOncogeneGamma(GROg)
胸腺生成su(TMPO)檢測試劑盒 forThymopoietin(TMPO)
內臟脂肪特異性絲氨suan蛋白mei抑制因子(Vaspin)檢測試劑盒 forVisceralAdiposeTissueDerivedSerineProteaseInhibitor(Vaspin)
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)檢測試劑盒 forHeatShockProtein90kDaBeta1(HSP90b1)
激肽原1(KNG1)檢測試劑盒 forKininogen1(KNG1)
羧肽meiX2(CPX2)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseX2(CPX2)
粘蛋白6(MUC6)檢測試劑盒 forMucin6(MUC6)
基質金屬蛋白mei2(MMP2)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase2(MMP2)
核糖體結合糖蛋白Ⅰ(RPN1)檢測試劑盒 forRibophorinI(RPN1)
跨膜絲氨suan蛋白mei6(TMPRSS6)檢測試劑盒 forTransmembraneProtease,Serine6(TMPRSS6)
胎球蛋白B(FETUB)檢測試劑盒 forFetuinB(FETUB)
轉化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBeta2(TGFb2)
YY肽(PYY)檢測試劑盒 forPeptideYY(PYY)
Caspase 6分光光度法檢測試劑盒雙醋suan酯標準品 規格:350mg 英文名稱:Triamcinolone Diacetate
維拉帕mi相關物質A標準品 規格:50mg 英文名稱:
醋suan膚輕松標準品 規格:100mg 英文名稱:Fluocinolone Acetonide
jia磺酰jia烷標準品 規格:200mg 英文名稱:Methylsulfonylmethane
二jia基亞砜標準品 規格:3g 英文名稱:Dimethyl Sulfoxide
丙tong 規格:1.5ml×3ampules 英文名稱:Acetone
2-丙chun標準品 規格:1.2ml×3ampules 英文名稱:2-Propanol
jiachun標準品 規格:3x1.5ml 英文名稱:Methyl Alcohol
鹽suan哌jia酯E異構體溶液標準品 規格:0.5ml 英文名稱:
lv化標準品 規格:200mg 英文名稱:Choline Chloride
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