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酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:59:28瀏覽次數(shù):177次

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酸性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)


3×10ml|3×20ml

FS-X9999

產品介紹:

用途:

細胞和組織的酸性磷酸酶染色

注意事項:

主要由萘酚、六氮化對品紅、亞等組成,染色后酶活性部位呈紅色。

儲存條件:-20℃,避光,6個月

注意事項:

1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

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操作步驟:

1、貼壁細胞的消化

①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。


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