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瑞氏染色液(Wright stain)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:54:33瀏覽次數:193次

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貨號 FS-X10098
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產品介紹:

用途:

適用于細胞涂片、細菌等染色

注意事項:

主要由瑞氏染色液、磷酸鹽緩沖液組成,細胞質呈紅色,細胞核及細菌呈藍色,嗜酸性顆粒呈橘紅色。

儲存條件:室溫,24個月

中文名稱:瑞氏染色液(Wright stain)

英文名稱:

產品規格:2×100ml|2×500ml

貨號:FS-X10098

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

哈茨木霉CD299抗體Human SCARB2 (Lysosome membrane protein 2) 人β膠原交聯(bCTx)免疫試劑盒

云芝栓孔菌 (變色栓菌)雙特異性蛋白磷6/絲裂原活化蛋白激磷3抗體Human SFMBT1 (Scm-like with four MBT domains protein 1) 人β-肌動蛋白(β-actin)免疫試劑盒

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銹赤蠟黃鏈霉菌胞漿動力蛋白輕鏈1抗體Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) 人β淀粉樣多肽42(Aβ 42)免疫試劑盒

膜醭假絲酵母背根神經節同源蛋白DRGX抗體Human RHOT1 (Mitochondrial Rho GTPase 1) 人β淀粉樣蛋白25-35(Aβ25-35)免疫試劑盒

堿線菌屬DeltaD抗體Human AHR(Aryl hydrocarbon receptor) 人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)免疫試劑盒

Rhizobium multihospitium 神經特異性轉錄因子DAT1抗體Human RD3 (Protein RD3) 人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒

甘蔗生節棱孢對接蛋白3抗體Human RASAL1 (RasGAP-activating-like protein 1) 人β半乳糖(βGAL)免疫試劑盒

根瘤菌DCN1樣蛋白2抗體Human RRAD (GTP-binding protein RAD) 人β基己糖A(β-Hex A)免疫試劑盒

豬鏈球菌Streptococcus│suis 質量規格:100µg/mL,,基體:1%HNO3兒茶沒食子

地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質量規格:1000μg/ml in 10%HCl單咖啡酰

戊糖乳桿菌Lactobacillus│pentosus 質量規格:1000μg/ml小檗
瑞氏染色液(Wright stain)釀酒酵母 α,ω-雙{2-[(3-羧基-1-氧基)氨基]乙基}聚乙二鞘磷脂

釀酒酵母 2,5-二溴苯甲酯酰ACP硫酯

塔賓曲霉 異基化鎂化鋰絡合物磷脂二酰甘油酰基轉移

微黃大洋芽孢桿 2--4-甲基三氟甲苯二酰甘油轉酰

戈登氏屬 2,3,3-基-3H-苯并[g]色C氧化

灰樹花2號 硫釔(III),八水半胱合成

馬賽 硫鋅,一水肌加氧

花楸盤多毛孢 3-溴-7-氮雜肌加氧

Pseudomonas koreensis Kwon et al.  銦粒

蠟樣芽孢桿 3,5-二庚酮β-伴球蛋白

巴斯德駒形氏酵母 3-馬來酰亞基伴球蛋白

巴西果小克銀漢霉 4-氨基煙水蘇糖

根瘤 2-(3,4-二甲氧基苯基)乙棉籽糖

綠毛殼擬毛梭孢變種 5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyr脫落抗體

枯草芽孢桿 ADA 單鈉鹽脂質過氧化物

 


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