細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：小鼠精原細胞系    

產品英文：GC-1 spg

貨號：FS-01X9636

細胞培養條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒 Human Vascuolar cell adhesion molecule 1，VCAM-1 ELISA Kit

人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒Human Tumor necrosis factor β，TNF-β ELISA Kit

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 Human Tumor necrosis factor α，TNF-α ELISA Kit

人轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Human Transforming Growth factor β1，TGF-β1 ELISA Kit

人轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒Human transforming growth factor α，TGF-α ELISA Kit

人干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒Human Stem cell factor/mast cell growth factor，SCF/MGF ELISA Kit

人可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand，sCD40L ELISA Kit

人可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand，sCD30L ELISA Kit

人P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA試劑盒Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA Kit

人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor AB，PDGF-AB ELISA Kit

人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α，PDGFsR-α ELISA Kit

人巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒Human Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA Kit

人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA Kit

人L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒Human L-Selectin ELISA Kit

人白介素9(IL-9)ELISA試劑盒Human Interleukin 9，IL-9 ELISA Kit

人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒 Human Interleukin 8，IL-8 ELISA Kit

人白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 Human Interleukin 6，IL-6 ELISA Kit

人白介素-5(IL-5)ELISA試劑盒Human Interleukin 5，IL-5 ELISA Kit

人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒Human Interleukin 4，IL-4 ELISA Kit
小鼠精原細胞系GAPDH(3E12)-Loading Control  3-磷酸甘油醛脫氫酶單克隆抗體(內參抗體) 0.1ml

GAPDH   3-磷酸甘油醛脫氫酶抗體(內參抗體) 0.1ml

beta-Actin (Loading Control)  β-肌動蛋白抗體（內參抗體） 0.1ml

14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon)  14-3-3蛋白抗體 0.1ml

phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體 0.1ml

14-3-3 family protein  蘋果14-3-3蛋白抗體(植物) 1ml

GLI1/Zfp5  腦膠質瘤相關蛋白抗體（鋅指蛋白5） 0.1ml

Involucrin  囊包蛋白/內披蛋白抗體 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。