產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：小鼠骨樣細(xì)胞    

產(chǎn)品英文：MLO-Y4

貨號：FS-01X9638

細(xì)胞培養(yǎng)條件：MEMa+5%FBS+5%小牛血清+1%P/S  鼠尾膠原包被

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒Human neutrophil activating protein-2，NAP-2 ELISA Kit

人趨化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA試劑盒Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit

人堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)ELISA試劑盒Human basic fibroblast growth factor 9，bFGF-9 ELISA Kit

人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒 Human E-Selectin ELISA Kit

人鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒Human eosinophil chemotactic factor，ECF ELISA Kit

人CD30分子(CD30)ELISA試劑盒Human Cluster of differentiation 30，CD30 ELISA Kit

人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule，ALCAM ELISA Kit

人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒Human Activin A，ACV-A ELISA Kit

人心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒Human Atrial Natriuretic Peptide，ANP ELISA Kit

人內(nèi)肽-2(EM-2)ELISA試劑盒Human endomorphin-2，EM-2 ELISA Kit

人α-內(nèi)肽(α-EP)ELISA試劑盒Human α-Endomorphin，α-EP ELISA Kit

人抑制素(INH)ELISA試劑盒Human Inhibin，INH ELISA Kit

人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISA試劑盒 Human 6-hydroxydopamine，6-OHDA ELISA Kit

人心納素(ANF)ELISA試劑盒 Human atrial natriuretic factor，ANF ELISA Kit

人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISA試劑盒 Human myelin protein 2，p2 ELISA Kit

人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒 Human Neurokinins B，NKB ELISA Kit

人強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒Human dynorphin，Dyn ELISA Kit

人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒Human enkephalin，ENK ELISA Kit

人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒Human neuropeptide Y，NP-Y ELISA Kit
小鼠骨樣細(xì)胞phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser65/Thr70)  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

phospho-EIF4EBP1(Ser100)  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

phospho-EIF4EBP1(Ser111)  磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml

EIF5  真核翻譯起始因子5抗體 0.2ml

4EBP2  eIF4E結(jié)合蛋白2抗體 0.1ml

Cytokeratin 5/CK5  細(xì)胞角蛋白5抗體 0.1ml

5-HT  5-羥色胺抗體 0.1ml

HRPT2/CDC73/Parafibromin  甲狀旁腺功能亢進(jìn)蛋白2抗體（細(xì)胞分裂周期73） 0.2ml