當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96THRGP人羥脯氨酸糖蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | HRGP人羥脯氨酸糖蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein, HRGP Elisa Kit |
貨號 | FS-H63740 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Marinobacrium│georgiense 喬治亞海桿菌Marinobacrium│georgiense分離基物:沉積物/TVG淺黃色鈣質(zhì)軟泥凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在的生物轉(zhuǎn)化微生物/分離自含硫代鈉培養(yǎng)基:(硫氧化微生物)471生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Marinovum│algicola 棲藻海卵菌Marinovum│algicola分離基物:樣/多管上覆凍干物安全等級:1模式菌株:no大洋細(xì)菌471生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacillus│badius 栗褐芽孢桿菌Bacillus│badius分離基物:沉積物/深灰色沉積物凍干物安全等級:1模式菌株:no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)淀酶菌株471生長條件:15℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Colwellia│aestuarii 河口科爾韋爾氏菌Colwellia│aestuarii分離基物:沉積物/深灰色沉積物凍干物模式菌株:no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、淀酶菌株821生長條件:15℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Cellulosimicrobium│funkei 芬克纖維微菌Cellulosimicrobium│funkei分離基物:生物樣/赤棕魚/魚腸道內(nèi)容物凍干物模式菌株:no共生微生物/赤棕魚腸道共生菌;產(chǎn)酶微生物/蛋白酶471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Pseudomonas│peli 爛泥假單胞菌Pseudomonas│peli分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌,用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌;產(chǎn)酶微生物/脂酶(三丁甘油酯).471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Aurantimonas│manganoxydans 橙色單胞菌(加詞待譯)Aurantimonas│manganoxydans分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌,用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌;產(chǎn)酶微生物/脂酶(三丁甘油酯).471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:≤0.5% (war)
Pseudoalromonas│undina 蛹假交替單胞菌Pseudoalromonas│undina分離基物:生物樣/軟珊瑚凍干物安全等級:1模式菌株:no潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌,用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌 產(chǎn)酶微生物/脂酶(三丁甘油酯)471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
HRGP人羥脯氨酸糖蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486) 磷化組蛋白去乙酰化酶4、5、7抗體化矢車菊素6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽鹽Human SSADH (Succinate-semialdehyde dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit
PKN2 蛋白激酶N2抗體5-羥色胺5-溴基異萘Human POSTN/OSF-2 (Periostin) ELISA Kit
RKIP Raf激酶抑制蛋白抗體亥茅酚苷5-溴基異萘Human MMP-15 (Matrix Metalloproteinase 15) ELISA Kit
PKR 蛋白激酶R抗體異鼠李素-3-O-新橙皮苷5-溴基異萘Human MMP-14 (Matrix Metalloproteinase 14) ELISA Kit
Phospho-PKR (Thr446) 磷化蛋白激酶R抗體紫蓳靈(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human VLDL (Very Low Density Lipoprotein) ELISA Kit
Phospho-PKR (Thr451) 磷化蛋白激酶R抗體高麗槐素(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human LCAT (Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit
Phospho-PKR (Thr446/451) 磷化蛋白激酶R抗體秦皮苷(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘胺Human CYP2E1 (Cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1) ELISA Kit
AKT2 蛋白激酶B2奇任2-氨基茚滿鹽鹽Human UCRP (Ubiquitin Cross Reactive Protein) ELISA Kit
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