大鼠ELISA檢測試劑盒說明書

大鼠ELISA檢測試劑盒說明書性能：

1.靈敏度：小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2.特異性：不與其它細胞因子反應。

3.重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

大鼠ELISA檢測試劑盒嚴格注明：

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

結果判斷與分析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值。

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的ICAM-1/CD54標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的ICAM-1/CD54含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

4、敏感度：0.1ng/ml

操作步驟：

1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6.甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9.在450nm波長處測定各孔的OD值。