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備試劑與收集血樣:
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)?
產品名稱 | 小鼠抗心肌抗體(AMA)elisa進口試劑盒 |
英文名稱 | Mouse anti myocardial antibody (AMA) ELISA Kit |
貨號 | BJ-G9898 |
規格:96T/48T
特點:靈敏性高、特異性強、重復性好
用途:科研實驗等領域科學研究,不得用于臨床診斷
運輸:快遞(根據客戶要求,選擇具體的運輸方式)
試劑盒種屬:羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等
檢測程序:
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實驗前準備:
ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 抑氨肽酶(進口)質量規格:>99%,美國進口sc-202975Bestatin,Ubenimex
人軟骨細胞HC-a高藜蘆酸(標準品)質量規格:HPLC≥98.0%(3,4-Dimethoxyphenyl)acetic acid
羅猴胎腎細胞;MA104 腦膠質瘤細胞,C6細胞 NCI-H446 [H446](小細胞肺癌細胞)二乙酰一1(>98%,BR)質量規格:>98%,BRDiacetyl monoxime
人前列腺癌細胞;DU 145 [DU145;DU-145]馬來酸二乙酯(>98%,BR)質量規格:>98%,BRDiethyl maleate
TNFRSF14 Others Mouse 小鼠 HVEM / TNFRSF14 人細胞裂解液 (陽性對照) 二氫細胞弛素(>98%,BR)質量規格:>98%,BRDihydrocytochalasin B
KM小鼠未分化神經膠質瘤瘤株;B22草酸脫氫氨氯地平質量規格:美國進口Dehydro Amlodipine Oxalate
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr 腹水瘤細胞,S-180細胞 SVEC4-10細胞,小鼠結血管上皮樣細胞(R)-氨氯地平質量規格:美國進口(R)-Amlodipine
人永生化表皮細胞;HaCaT阿瑞匹坦-標記d4質量規格:美國進口Aprepitant - Labeled d4
CTLA4 Others Mouse 小鼠 CTLA4 / CD152 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿瑞匹坦-M3代謝物質量規格:美國進口Aprepitant-M3 Metabolite
猞猁皮膚成纖維樣細胞;ELS1OSI-420,游離堿(去甲埃羅替尼)質量規格:美國進口OSI-420, Free Base (Desmethyl Erlotinib)
兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2 癌細胞,MDA-MB-231細胞 J774A.1細胞,小鼠單核巨噬細胞potewwiumIODIDE化鉀ACS級白色小球RTsigma
人胚腎上皮細胞系;KiMA1-溴;正己基溴 1-BroMohqxcnq;n-Hqxyl broMidq 111-72-1
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/R0405050/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 基環務二1二聚物 MqTHYLCYCLOPqNTcDIqNq DIMqR 647-00-4
CL-0444SNU-5(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2SPRINTNEXTGEL10%Sprint NEXT膠, 10% 蛋白組學級RTsigma
LCK Others Human 人 Lck Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 103-90-2對乙酰基酚AcetaMinopxen
小鼠抗心肌抗體(AMA)elisa進口試劑盒人上皮細胞總RNAHMEpiC NA聚酰胺粉(柱層析用,10-30目)Polyamide質量規格:柱層析用,10-30目
CTSL1 Others Mouse 小鼠 CTSL / Cathepsin-L 人細胞裂解液 (陽性對照) 1酸氫二鈉,二水(for HPLC, ≥99%(T)) phosphate dibasic dihydrate質量規格:for HPLC, ≥99%(T)
HCT-15 人結腸癌細胞無水硫酸鈉(農殘級) sulfate anhydrous質量規格:農殘級
CL-0401NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2無水硫酸鈉(for HPLC,≥99.0%(T)) sulfate anhydrous質量規格:for HPLC,≥99.0%(T)
MSC, 小鼠雪旺細胞碳酸氫鈉(for HPLC,≥99.0%) bicarbonate質量規格:for HPLC,≥99.0%
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