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貨號	BJ-X97112

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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產品名稱	大鼠食管上皮細胞
規格	5×10?Cells/T25培養瓶
貨號	BJ-X97112

商品屬性：

名稱 大鼠食管上皮細胞

2.組織來源：食管組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

大鼠食管上皮細胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統發生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連，腹段很短與胃相連。在發育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變為復層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復層扁平上皮，耐摩擦，有保護作用。在食管與胃賁門交界處，復層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的復層扁平上皮細胞覆蓋，其頂端細胞膜和細胞間連接復合體聯合在一起產生有效滲透屏障，防止食管內容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細胞的基質外側細胞膜和深層細胞的全部細胞膜不暴露于食管腔內規律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學上講，食管上皮由兩層組成，基底層和分化層；其中，僅基底層的細胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發生和分化標記的依序表達。食管上皮細胞的培養是研究食管正常生理機制和食管癌變機制的非常好的體外模型。

5.方法簡介：

()實驗室分離的大鼠食管上皮細胞采用膠原酶聯合消化法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的大鼠食管上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-R027

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

圖片13.jpg

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

雙料乳糖膽鹽發酵培養基英文名稱：Double Lactose Bile Medium 產品規格：250g

BBL液體培養基英文名稱：BBL Liquid Medium 產品規格：250g

麥康凱肌醇阿東醇羧卞青瓊脂（MZAC）英文名稱：MZAC Agar 產品規格：100g

豬脯羥化(PHD)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠Ⅻ(FⅫ)免疫試劑盒現貨供應

小鼠γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒現貨供應

兔CD8分子(CD8)免疫試劑盒現貨供應

人蝸牛同源物1(果蠅)樣1蛋白(SNAIL1)免疫試劑盒現貨ows\system32\EhStorShell.dll

大鼠食管上皮細胞Strongyloides edentatus無齒類圓線蟲LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7 瘤/睪抗原家族4亞型7抗體規格: 0.2mlDog IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗犬IgM抗體規格: 0.1ml

Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. apii芹菜枯萎病PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周ADCY8 苷酸環化8抗體 0.2mlRabbit Anti-Goat IgG/Bio 標記的兔抗羊IgG 規格: 0.1ml

Cortex ailanthi椿皮探針法PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周PRKD3 蛋白激C nu型抗體規格: 0.2mlGPR15 G蛋白偶聯受體15抗體規格: 0.1ml

Trichostrongylus rugatus皺紋毛圓線蟲LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周phospho-TRIM25(Ser100) 磷酸化雌激素反應指狀蛋白抗體規格: 0.1mlPCDHB15/PCDHB22 原鈣粘蛋白15抗體規格: 0.2ml

Porphyromonas gingivalis 牙齦卟啉單胞探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周hnRNP K 異質核糖核蛋白K抗體規格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/Cy7 Cy7標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml

Rhizoma homalomenae千年健LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周CDK14/PFTK1 周期蛋白依賴性激14抗體規格: 0.2mlSATB1 核基質結合區結合蛋白1抗體規格: 0.1ml

Avian Nephritis Virus(ANV)禽腎炎病毒通用RT-LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周BIN3 細胞骨架銜接蛋白BIN3抗體規格: 0.2mlFbxW2 FbxW2蛋白抗體規格: 0.2ml

Providencia alcalifaciens產堿普羅威登斯探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周sLOX 1 可溶性凝集素樣氧化脂蛋白受體1抗體規格: 0.2mlTORC1/CRTC1 環苷酸應答元件結合蛋白轉錄共激活因子TORC1抗體規格: 0.2ml

Ditylenchus destructor腐爛莖線蟲PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM/Bio 標記的羊抗小鼠IgM 規格: 0.1ml

Rhizoma cynanchi stauntonii白前PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周Plakophilin 2 橋粒斑菲素蛋白2抗體規格: 0.2ml