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大鼠淋巴結淋巴細胞

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 09:32:02瀏覽次數:287次

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貨號 BJ-X97526
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產品名稱

大鼠淋巴結淋巴細胞

規格

5×10?Cells/T25培養瓶

貨號

BJ-X97526

商品屬性:

名稱    大鼠淋巴結淋巴細胞

2.組織來源:淋巴結

3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介:

大鼠淋巴結淋巴細胞分離自淋巴結;淋巴結是哺乳類*的周圍淋巴器官,由淋巴細胞集合而成。呈豆形,位于淋巴管行進途中,是產生免疫應答的重要器官之一。淋巴結表面包有被膜,被膜的結締組織伸入淋巴結內形成小梁,構成淋巴結的支架。被膜下為皮質區,淋巴結的中心及門部為髓質區。皮質區有淋巴小結、彌散淋巴組織和皮質淋巴竇(簡稱皮竇),髓質包括由致密淋巴組織構成的髓索和髓質淋巴竇(簡稱髓竇)。淋巴竇的竇腔內有許多淋巴細胞和巨噬細胞,從輸入淋巴管流來的淋巴液先進入皮竇再流向髓竇,最后經輸出淋巴管離開淋巴結。淋巴結的主要功能是濾過淋巴液,產生淋巴細胞和漿細胞,參與機體的免疫反應。淋巴結腫大或疼痛常表示其屬區范圍內的器官有炎癥或其他病變。主要功能是濾過淋巴液,產生淋巴細胞和漿細胞,參與機體的免疫反應;當局部感染時,細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入,引起局部淋巴結腫大。如該淋巴結不能阻止和消滅它們,則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉移。淋巴結淋巴細胞是白細胞的一種,由次級淋巴器官淋巴結產生,是機體免疫應答功能的重要細胞成分;細胞為圓形細胞核,細胞質少。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖,繼而發揮其免疫功能。

5.方法簡介:

()實驗室分離的大鼠淋巴結淋巴細胞采用分離淋巴結組織、研磨獲取單細胞懸液后通過密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為1×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

()實驗室分離的大鼠淋巴結淋巴細胞經過檢測,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基含FBS、生長添加劑、PenicillinStreptomycin

產品貨號CM-R172

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性懸浮

細胞形態圓形

傳代特性不增殖;不傳代

消化液0.25%

培養條件氣相:空氣,95%CO25%

細胞培養步驟:

.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

圖片13.jpg 

細胞培養操作規程:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。

二.細胞處理:

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

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操作要點:

1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。

2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。

5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。

6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

 


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