使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩定轉染細胞的篩選

1）     轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5） 之后更換正常培養基培養即可。

公司產品具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產品名稱：代謝性骨疾病固定液說明書

貨號：BJ-01R3690

規格：500ml

分類：固定液

儲存條件：室溫,避光,12個月

用途：代謝性骨疾病組織的固定

注意事項：主要由甲醛、磷酸鹽緩沖液組成。

注意事項：

1、盡注意無菌操作，避免污染。

2、避免反復凍融。

3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

標準溶液的配制：

1.直接配制法    對于純凈的物質(稱做基準物質)可準確進行稱量，用蒸餾水溶解后，轉移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線，溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質的純度、性質等對濃度有較大影響，為此，對用來直接配制標準溶液用的基準物質必須具備以下條件：

(1)物質的純度要高，含量不得低于99.9％，雜質的含量應當少到可以忽略的程度。

(2)物質的分子組成應與其化學式*符合，包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。

(3)性質穩定，貯蔵時應不發生變化，不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分，不易風化潮解和被空氣氧化，烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質以減小稱量誤差。

2.間接配制法    凡不符合基準物質條件的物質，可先配制成近似所需濃度的溶液，再用基準物質溶液或能與其發生定量反應的標準溶液進行滴定，求其準確濃度，這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定"。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制，可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質轉移到干凈的試劑瓶中，先加少量蒸餾水將其溶解，繼續用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數試劑不符合基準物的條件，故間接法配制標準溶液是經常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質；濃鹽酸因易揮發而無法準確稱量；不易得到分析純級的試劑等，這些物質的標準溶液須用間接法來配制，經標定后再做標準溶液使用。

標準溶液的標定：

1.用基準物質標定法

(1)多次稱量法    用減重法精密稱取幾份(如2～3份)基準物質，分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內，各加少量蒸餾水溶解，再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點，各自記錄所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量分別算出溶液的準確濃度，最后取平均值做為標準溶液的濃度。

(2)移液管法    精密稱取一份基準物質，在干凈的小燒杯內加少量蒸餾水溶解，順玻棒全部轉移到已校正好的容量瓶中，多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中，最后配成一定體積的溶液，混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉移至錐形瓶中，加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點，每次做好記錄，根據所消耗待標定溶液的體積，結合基準物質的重量，分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。

2.比較法標定    如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應，可吸量一定體積的某標準溶液，用待標定溶液滴定，或吸量一定體積的待標定溶液，用某標準溶液滴定。根據兩溶液所消耗的毫升數及某標準溶液的濃度，按N1V1＝N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法"標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時，就會直接影響待標定溶液濃度的準確性，顯然比較法不如用基準物質直接標定的方法精確，但比較法簡便易行。

標定完畢，蓋緊標準溶液試劑瓶塞，瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。

Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus(XHFV)新疆出血熱病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCDC158  卷曲螺旋結構域蛋白158抗體 規格: 0.2ml

駱駝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TP53I13  瘤蛋白p53誘導蛋白13(瘤抑制基因) 規格: 0.2ml

Staphylococcus sciuri松鼠葡萄球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PRMT4  組蛋白甲基轉移CARM1抗體 規格: 0.2mlKF1/ZFP103  鋅指蛋白103抗體 規格: 0.2ml

Cooperia pectinata點狀古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-Ephrin B(Tyr324/329)  磷酸化Ephrin B抗體 規格: 0.1mlATG9B  自噬相關蛋白9B抗體 規格: 0.2ml

Radix astragali黃芪探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Catalase  過氧化抗體 規格: 0.1mlNIR2  膜磷脂轉移蛋白1抗體 規格: 0.2ml

Caprine Herpesvirus 2(CpHV-2)山羊皰疹病毒2型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周DARPP32  多巴胺、cAMP調節磷蛋白抗體 規格: 0.2mlMLCK  肌球蛋白輕鏈激抗體 0.1ml

Neospora caninum犬新孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HIV1 p55 + p17  艾滋毒p55抗體 規格: 0.2mlPAR3  非典型蛋白激C特定相互作用蛋白抗體 規格: 0.1ml

Herba siegesbeckiae豨薟草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周RXR Alpha/RXRA/Retinoid X receptor  核受體RXRα抗體 規格: 0.1mlDNAH10  軸絲動力蛋白10抗體 規格: 0.2ml

魚源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TREM1  髓系細胞觸發受體1抗體 規格: 0.2mlphospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180)  磷酸化KB抑制蛋白激α抗體 規格: 0.1ml

Highlands J Virus高地J病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgG/HRP  辣根過氧化物標記的兔抗雞IgG 規格: 0.1mlPRDM1/Blimp1  B淋巴細胞誘導成熟蛋白1抗體 規格: 0.2ml

代謝性骨疾病固定液說明書RNF215  環指215抗體 規格: 0.2ml

Axin1  軸1抗體 規格: 0.1ml

IL-21  白介21抗體 規格: 0.2ml

phospho-ANTXR1(Tyr382)  磷化瘤管內皮標志物8抗體 規格: 0.1mlCNTD  細胞周期N端結構域1抗體 規格: 0.2ml

SnoN  Smad核轉錄共抑制因子抗體 規格: 0.2ml

Rabbit anti-Rat IgG whole serum  兔抗大鼠IgG抗清 規格: 1mlMouse Anti-human IgM/Bio  標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.3ml

Phospho-Rb(Ser788)  磷化視網膜母細胞瘤相關1抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy3  PE-Cy3標記的兔抗抗體IgG 規格: 0.1mlPGGT1β  香葉烯基轉移1β抗體 規格: 0.2ml

PCDHGB2  原鈣粘γB2抗體 規格: 0.2mlRAB40A  RAS基因家族RAB40A抗體 規格: 0.2ml

BAP135/TFII I  激BAP135抗體 規格: 0.2ml

NSE1/FAM84A  感覺神經1抗體 規格: 0.2ml