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商品屬性：

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

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賴脫羧培養基 英文名稱：Lysine-decarboxylase Test Broth 產品規格：5g

酪蛋白胨大豆吐溫20培養基 英文名稱：Casein DigestSoy LecithinPolysorbate 20 Medows\system32\EhStorShell.dll

小鼠骨髓樹突狀細胞(DC細胞)Moschus麝香探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Calbindin/Calbindin D28k  鈣結合蛋白D28K抗體 規格: 0.2mlphospho-Bid (Ser65)  磷酸化BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體 規格: 0.1ml

Mycobacterium africanum非洲分枝桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PCDHGB2  原鈣粘蛋白γB2抗體 規格: 0.2mlRAB40A  RAS基因家族蛋白RAB40A抗體 規格: 0.2ml

Coccidioides immitis粗球孢子探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-rat IgG/HRP  辣根過氧化物標記的羊抗大鼠IgG 規格: 0.1mlUBE2E3  泛素蛋白連接E3抗體 規格: 0.2ml

Canine respiratory coronavirus, CRCoV(CRCoV)犬呼吸道病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ERAB/HSD17B10  內質網Aβ相關結合蛋白抗體 規格: 0.1mlBrain protein CG6  腦蛋白CG6抗體 規格: 0.2ml

Canine Adenovirus (CAV)犬腺病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-EIF4EBP1(Ser100)  磷酸化eIF4E結合蛋白抗體 0.1mlRRAS  原基因R-Ras抗體 規格: 0.2ml

Transmissible Gastroenteritis Virus(TGEV)豬傳染性胃腸炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周WNT7B  Wnt蛋白家族7B抗體 規格: 0.2mlIL-16  白介素16抗體 規格: 0.1ml

Seneca virus(SVA) 塞內卡病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ATEXPA10  植物延蛋白（擬南芥） 規格: 1mlMTF-1  金屬應答元件結合轉錄因子-1抗體 規格: 0.2ml

Human Parainfluenza Virus 4A(HPIV-4A)人副流感病毒4A型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HEF1  蛋白激底物相關蛋白抗體 規格: 0.2mlMUC15  粘蛋白15抗體 規格: 0.2ml

Aspergillus flavus黃曲霉LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human sIgA/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗人分泌型IgA 規格: 0.1mlDonkey Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的驢抗兔IgG 規格: 0.1ml

Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)羅氏沼蝦諾達病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周RAR Beta  維甲酸受體β抗體 規格: 0.1mlOLIG2  少突膠質細胞轉錄因子2抗體 規格: 0.2ml

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。