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貨號	BJ-X97306

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

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產品名稱	腹膜毛細血管內皮細胞
規格	5×10?Cells/T25培養瓶
貨號	BJ-X97306

商品屬性：

名稱 腹膜毛細血管內皮細胞

2.組織來源：腹膜組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

人腹膜毛細血管內皮細胞分離自腹膜組織；腹膜是存在于高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜，主要由間皮細胞和間質（結締組織、纖維、毛細血管、淋巴管）構成，藉由結締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內的器官，能分泌黏液潤濕臟器的表面，減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和神經組織經由腹膜與外界相連；腹膜也具有吸收撞擊保護內臟的效果。腹膜（peritoneum）為全身面積最大、配布最復雜的漿膜，由皮及少量結締組織構成，薄而光滑，呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內表面的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續、移行，共同圍成不規則的潛在性腔隙，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity）。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內有少量漿液，在臟器活動時可減少摩擦。腹膜的主要生理功能：①分泌功能；②吸收功能；③再生能力；④防御功能；⑤調理功能。臟、壁腹膜都有豐富的毛細血管，毛細血管上有不同的孔徑；腹膜的毛細血管和毛細血管后靜脈是進行溶質交換的主要場所。

5.方法簡介：

()實驗室分離的人腹膜毛細血管內皮細胞采用膠原酶-聯合消化法結合化學試劑抑制法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的人腹膜毛細血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-H088

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態內皮細胞樣

傳代特性可傳2-3代

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

圖片13.jpg

細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

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腹膜毛細血管內皮細胞Varroa jacobsoni雅氏瓦螨LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周CPSF4/CPSF30 剪切和多聚苷酸化特異性因子4抗體規格: 0.2mlRabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的兔抗水貂IgG 規格: 0.1ml

Bifidobacterium bifidum兩岐雙岐桿探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周DISC1(NT) DISC1 N端抗體規格: 0.2mlADAMTSL2 整合素樣金屬蛋白與凝樣2蛋白抗體規格: 0.2ml

Herba plantaginis車前草LAMP鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周CD20 CD20抗體規格: 0.1mlMetallothionein 3 金屬硫蛋白3抗體規格: 0.2ml

Histoplasma capsulatum var. farciminosum莢膜組織胞漿馬皮疽變種LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周Mouse Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC標記的小鼠抗豚鼠IgG 規格: 0.1mlDPF2/D4 zinc and double PHD fingers family 2 雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體規格: 0.2ml

Spotted Knifejaw Iridovirus(SKIV)斑石鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周phospho-APP/ABPP(Thr668) 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體規格: 0.1mlOsterix 成骨相關轉錄因子抗體規格: 0.1ml

Stenotrophomonas maltophilia嗜麥芽窄食單胞染料法熒光定量PCR試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周phospho-ATF2 (Thr55) 磷酸化活化復制因子2抗體規格: 0.1mlHDAC11 組蛋白去乙酰化11抗體規格: 0.1ml

鱈魚源性成分LAMP試劑盒種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周p38MAPK/MAPK14/p38Alpha 絲裂原活化蛋白激p38α抗體規格: 0.1mlGoat Anti-human IgM/HRP 辣根過氧化物標記的羊抗人IgM 規格: 0.1ml

Edwardsiella ictaluri鮰愛德華氏LAMP試劑盒動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周SORBS2/ArgBP2 結合蛋白2抗體規格: 0.2mlPhospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) 磷酸化S6核糖體蛋白抗體規格: 0.1ml

Zucchini Yellow Fleck Virus(ZYFV)南瓜黃斑病毒RT-PCR試劑盒植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-3周DNA PK/PRKDC DNA依賴性蛋白激抗體規格: 0.2mlMouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5.5 Cy5.5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體規格: 0.1ml

Herba violae紫花地丁PCR鑒定試劑盒中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次低溫負20度一年 2-4周BCHE (CT) 丁酰酯抗體(C端) 規格: 0.1mlphospho-B-Raf (Ser365) 磷酸化B-Raf抗體規格: 0.1ml