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貨號 | BJ-X97160 |
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操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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產品名稱 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 |
貨號 | BJ-X97160 |
商品屬性:
名稱 結腸黏膜上皮細胞 2.組織來源:結腸組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人結腸黏膜上皮細胞分離自結腸組織;結腸在右髂窩內續于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分,大部分固定于腹后壁,結腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結締組織),肌層(內環形、外縱行兩層平滑肌),外膜(纖維膜或漿膜)。腸黏膜上皮細胞是機體內外環境的重要屏障,持續暴露于大量抗原中,也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此,腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,在黏膜免疫反應的起始階段發揮關鍵作用,它決定黏膜免疫反應的發生、性質和強度。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養方法,為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型。 5.方法簡介: ()實驗室分離的人結腸黏膜上皮細胞采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的人結腸黏膜上皮細胞經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H040 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態上皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25% 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
犬胰高血糖素樣肽1(GLP1)免疫試劑盒現貨供應
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小鼠葡萄糖調節蛋白78(GRP78)免疫試劑盒現貨供應ows\system32\EhStorShell.dll
結腸黏膜上皮細胞Cryptosporidium baileyi貝氏隱孢子蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Solute carrier family 1 溶質攜帶物家族-1抗體 規格: 0.2mlOCEL1 緊密連接蛋白/小分子膠原蛋白OCEL1抗體 規格: 0.2ml
Dermatobia hominis人膚蠅探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周LACE1 泌升高蛋白1抗體 規格: 0.2mlBAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2 腦特異性管生成抑制蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Fructus lycii枸杞子染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-rat IgM/Gold 膠體金標記的兔抗大鼠IgM 規格: 0.5mlAFP 甲胎蛋白抗體 0.1ml
Yersinia enterocolitica小腸結腸炎耶爾森LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GPI 糖磷脂酰肌醇抗體 規格: 0.1mlCD84/SLAMF5 CD84抗體 規格: 0.1ml
Cysticercus cellulosae豬囊尾蚴探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CFTR 囊性纖維化跨膜轉運調節因子抗體 規格: 0.2mlGFI1B 獨立生因子1B抗體 規格: 0.2ml
鯊魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Donkey Anti-human IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的驢抗人IgG 規格: 0.1mlHBV pre S1/S2 protein 人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗體 規格: 0.1ml
核桃源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit anti-chicken IgM whole serum 兔抗雞IgM抗清 規格: 1mlDPOLA/DNA polymerase alpha DNA聚合α抗體 規格: 0.2ml
Avian Sarcoma Virus(ASV)禽類肉瘤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ARA24 雄激素受體相關蛋白24抗體 規格: 0.2mlRabbit Anti-horse IgM/Cy3 Cy3標記的兔抗馬IgM 規格: 0.1ml
Pseudomonas syringae pv. sesami丁香假單胞桿芝麻致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCDC138 卷曲螺旋結構域蛋白138抗體 規格: 0.2mlAQP8/Aquaporin 8 水通道蛋白8抗體 規格: 0.2ml
Herba taraxaci蒲公英PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-ITGB3(Tyr773) 磷酸化整合素β3抗體 規格: 0.1mlExportin 1/CRM1 染色體區域穩定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區域穩定必需蛋白抗體 0.1ml
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