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大鼠組織型纖溶酶原激活劑elisa檢測試劑盒的實驗操作程序總結

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大鼠組織型纖溶酶原激活劑elisa檢測試劑盒

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合ELISA試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.溫育60分鐘后,棄去孔大鼠組織型纖溶酶原激活劑elisa檢測試劑盒內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進行檢測。

大鼠組織型纖溶酶原激活劑elisa檢測試劑盒的實驗操作程序總結

1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘

3.洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘

4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘

5.加入終止液

6.15分鐘之內度OD值

7.計算

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