小鼠elisa檢測試劑盒實驗操作各環(huán)節(jié)小竅門
1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，具體方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
3、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。
4、洗滌板：可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差，人為因素很大（當然有條件的用洗板機除外），洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。
5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費，太低則著色淺。
6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。
7、每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。
小鼠elisa檢測試劑盒酰化刺激蛋白(ASP)ELISA試劑盒 ，英文名： ASP ELISA Kit

纖維母細胞生長因子受體1癌基因伴侶(FGFR1OP)ELISA試劑盒 ，英文名： FGFR1OP ELISA Kit

纖維母細胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒 ，英文名： FSP ELISA Kit

纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)ELISA試劑盒 ，英文名： FRA ELISA Kit

纖維連接蛋白(FN)ELISA試劑盒 ，英文名： FN ELISA Kit

纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒 ，英文名： fgl2 ELISA Kit

纖維膠凝蛋白3(FCN3)ELISA試劑盒 ，英文名： FCN3 ELISA Kit

纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 ，英文名： FDP ELISA Kit

纖維蛋白原α鏈(FGA)ELISA試劑盒 ，英文名： FGA ELISA Kit

纖維蛋白原(Fb)ELISA試劑盒 ，英文名： Fb ELISA Kit

纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒 ，英文名： PL/Fbn ELISA Kit

纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒 ，英文名： Fibrin ELISA Kit

纖調(diào)蛋白(FMOD)ELISA試劑盒 ，英文名： FMOD ELISA Kit

纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒 ，英文名： TAFI ELISA Kit

纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒 ，英文名： PAI-1 ELISA Kit

纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒 ，英文名： PAI ELISA Kit小鼠elisa檢測試劑盒