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細胞培養技術是生物醫學研究中一個基礎且關鍵的技術,廣泛應用于細胞生物學、藥理學、遺傳學、癌癥研究等領域。一個全面的細胞培養技術總結應該包含以下幾個方面:
1. 培養環境
溫度:大部分哺乳動物細胞在37°C下培養最為理想。
濕度:高濕度環境有助于防止培養基過早蒸發,通常在細胞培養箱內維持相對濕度在95%以上。
氣體組成:5% CO?是常用的培養箱氣體環境,有助于維持培養基pH的穩定。
2. 培養基和營養物質
培養基類型:液體培養基通常包含必需的氨基酸、糖類、維生素、無機鹽、緩沖系統等,不同類型的細胞可能需要特定的培養基。
添加劑:如血清(通常是胎牛血清)、生長因子、激素、抗生素等,以支持細胞生長和減少微生物污染。
3. 細胞種類和特性
原代細胞和細胞系:原代細胞直接從組織中分離出來,而細胞系則是通過不斷傳代獲得,可以無限增殖。
貼壁細胞與懸浮細胞:貼壁細胞需要附著在培養容器的表面生長,而懸浮細胞則可以在培養基中自由生長。
4. 培養容器和設備
培養容器:包括組織培養瓶、培養皿、細胞工廠等,根據細胞種類和實驗規模選擇。
重要設備:細胞培養箱(提供適宜的溫度、濕度和CO?環境)、生物安全柜(無菌操作)、離心機、顯微鏡等。
5. 無菌技術
保持操作環境無菌是成功細胞培養的關鍵,包括使用無菌操作技巧、定期消毒實驗室設備和表面等。
6. 傳代和亞克隆技術
傳代:定期移除老化的細胞,并將健康的細胞轉移到新的培養基中繼續生長。
亞克隆:從異質性細胞群體中選擇單一細胞,用以建立具有一致性的細胞系。
7. 凍存和復蘇
細胞可以在低溫下長期保存(通常是液氮溫度,-196°C),需要特定的凍存培養基和程序來保護細胞。
8. 質量控制
污染檢測:定期檢查細胞培養的微生物污染,包括細菌、真菌和支原體。
細胞驗證:確認細胞的身份和特性,避免交叉污染
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