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PCR反應DNA 復制所需的基本要素

時間:2023/2/27閱讀:671
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聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一項利用 DNA 雙鏈復制原理,在生物體外復制特定 DNA 片段的的核酸合成技術。可在短時間內大量擴增目的 DNA 片段,而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。

DNA 的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈 DNA 在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在 DNA 聚合酶的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現,DNA 在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制 DNA 的變性和復性,加入設計引物,DNA 聚合酶,dNTP 就可以完成特定基因的體外復制,這是 PCR 的理論基礎。PCR 反應是在體外模擬 DNA 的復制過程,因此反應體系中必須具有 DNA 復制所需的基本要素:

1、模板(template),含有需要擴增的 DNA 片段。

2、引物(primer),一對引物決定了需要擴增的起始和終止位置。

3、聚合酶(polymerase ),DNA 聚合酶復制需要擴增的區域。

4、脫氧核苷三磷酸(dNTP),用于構造新的互補鏈。

5、緩沖液(buffer),提供適合聚合酶行使功能的化學環境。


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