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《熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范》征求意見

儀表標準 2021年05月07日 08:53:18來源:儀表網 26596
摘要5月6日,貴州省市場監督管理局發布了《熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范》征求意見稿,現開始公開征求意見。

  【儀表網 儀表標準】5月6日,貴州省市場監督管理局發布了《熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范》征求意見稿,現開始公開征求意見。
 
  2020年隨著新型冠病毒在全球的快速傳播和高感染率,如何快速、高效的確診新冠病毒患者顯得尤為重要,實時熒光定量PCR儀因其時間短、成本低等特點,已成為目前應用最廣泛的新冠肺炎確診方法之一。實時熒光定量PCR儀用于精確檢測新型冠狀病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
 
  實時熒光定量PCR儀(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)是在聚合酶鏈式反應技術(Polymerase Chain Reaction,PCR)的基礎上研發出來的新技術,所謂real-time quantitative PCR技術,是一種新的核酸定量技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。熒光定量可以實現精確定量,普通PCR則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通PCR無法實現的。實時熒光定量PCR分析儀主要通過儀器內部熱循系統的升降溫變化,使得DNA或RNA片段得以復制擴增,儀器光學系統采集伴隨DNA或RNA擴增產生的熒光信號,并對熒光信號進行分析轉化、數學運算后,得到擴增和熔解曲線。具體數據就是實時熒光定量PCR儀的重要參數Ct值(Ct value)、閾值(threshold)和基線(baseline)。通常,第3-15個循環的熒光值就是基線,是由于測量的偶然誤差引起的。閾值一般是基線的標準偏差的10倍。在實際操作中也可以手動調節,位于指數期就可以。Ct值就是熒光值達到閾值時候的PCR循環次數。所以是一個沒有單位的參數。
 
  在熒光信號定量部分,由于Ct值直接關系定量準確度,對于實時熒光定量PCR分析儀來說,Ct值是實時熒光定量PCR分析儀光學系統主要的校準參數。除此之外,還要進行熒光強度檢測重復性和熒光線性相關性的校準。
 
  根據黔市監辦函〔2020〕603號文件下達的“ 熒光定量聚合酶鏈反應分析儀校準規范”制定任務,制定出適合貴州省醫用麻醉機的地方計量校準規范,滿足貴州省計量工作的需要,使熒光定量聚合酶鏈反應分析儀計量性能準確可靠,測量結果具有溯源性,進而為正確診斷提供計量保障,為熒光定量聚合酶鏈反應分析儀的質量監督、校準、質控安全等提供技術依據。
 
  本規范依據JJF 1071-2010《國家計量校準規范編寫規則》和JJF 1001-2011《通用計量術語及定義》的要求編寫,依據JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》給出了校準結果測量不確定度及評定示例。校準方法及計量特性等主要參考了JJF 1527-2015《聚合酶鏈反應分析儀校準規范》、YY/T 1173-2010《聚合酶鏈反應分析儀》、JJF1101-2019 《環境試驗設備溫度、濕度參數校準規范》。
 
  依據JJF 1071-2010《國家計量校準規范編寫規則》,本規范內容包括范圍、引用文件、概述、計量特性、校準條件、校準項目、校準方法、校準結果的表達等內容。
 
  本規范為首次發布。本規范適用于熒光定量聚合酶鏈反應分析儀的校準,其他類型聚合酶鏈反應分析儀,可參照本規范執行。

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