隨著我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，越來越多的抗生素被應用于漁業(yè)中，這些藥物的使用幾乎貫穿養(yǎng)殖的全過程，由于養(yǎng)殖戶不遵守休藥期規(guī)定及未正確使用藥物，造成在水產(chǎn)品中的高水平殘留。人長期攝入含抗生素殘留的水產(chǎn)品后，藥物不斷在體內(nèi)蓄積，當濃度達到一定量后，就會對人體產(chǎn)生毒性作用，四環(huán)素類藥物的毒性反應主要表現(xiàn)為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等。還會造成過敏反應，二重感染，致畸胎作用。而*、*鈉有嚴重的副作用，它能抑制人體骨髓造血功能而引起再生障礙性貧血和粒狀白細胞缺乏癥等疾病，對人類的健康構(gòu)成潛在的危害。因此，水產(chǎn)品中抗生素殘留量的檢測技術，日益受到國內(nèi)外學者的關注。本整體分析方案用固相萃取(SPE)-有效液相色譜儀分析法進行6種抗生素的同時固相萃取和測定的**條件，結(jié)果令人滿意。
一、實驗部分
1、儀器與試劑
     有效液相色譜儀LC-3000，二極管陣列檢測器，G1313A ALS自動進樣器； C18 5μm 250mm×4.6mm液相色譜柱。固相萃取小柱為ZORBAX SPE C18Cart。12頭固相萃取真空富集裝置。*KS—500D，超速離心機LD4 —2，攪肉機，渦旋混合器。甲醇(色譜純)，*(分析純)，EDTA(分析純)，高氯酸溶液(優(yōu)級純)、硝酸(優(yōu)級純)。*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標準品。
2、有效液相色譜分析條件
     色譜柱為 C18  5μm 250mm×4.6mm，流動相為0.O1mol/L*+0.001 mol/L EDTA:甲醇=60:40(V/V，pH=2.0)，流速為0.8ml/min，檢測波長為268nm柱溫為25℃，進樣量為20μl。
3、實驗方法
    (1)*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標準儲備液的配制
分別稱取O.0100mg*、四環(huán)素、*、*、*、*鈉標準品置于6個1Oml容量瓶中，分別加入甲醇溶解并定容至刻度，此溶液濃度分別為1.00mg/ml，置于冰箱冷藏室保存。
    (2)混合標準中間液的配制
分別吸取*、四環(huán)素標準儲備液各1.00ml，*、*、*、*鈉標準儲備液各 2.00m1.置于100ml容量瓶中，用流動相A液定容至刻度，此溶液濃度分別為：*(10μg/m1)、四環(huán)素(10μg/m1)、*(20μg/m1)、*(20μg/m1)、*(20μg/m1)、*鈉(20μg/m1)，置于冰箱冷藏室保存。
    (3)標準使用液的配制
準確吸取混合標準中間液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0ml分別置于1Oml容量瓶中，用流動相A液定容至刻度，擁有的標準系列為：0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0μg/m1(*、四環(huán)素);0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μg/m1(*、*、*、*鈉)。
    (4)流動相A液的配制
0.01mol/L*+0.001mol/L EDTA，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過濾。
    (5)流動相B液的配制
0.01mol/L*，用30%硝酸調(diào)至pH=2.0，經(jīng)0.45μm雙層水系濾膜過濾。
    (6)樣品前處理
準確稱取5.00g攪碎的水產(chǎn)品于5Oml帶蓋的塑料離心管中，加入20%高氯酸溶液 15ml，渦旋1min，將此離心管放入*中提取20min后，用離心機離心10min，收集上清液于25ml容量瓶中，往殘渣中加入1Oml 2%高氯酸溶液，用玻棒攪動使樣品均勻分散于高氯酸溶液中，將此離心管放入*中提取20min后，用離心機離心10min，收集上清液于上述 25ml容量瓶中，合并兩次上清液，用2%高氯酸溶液定容，取該提取液1O ml經(jīng)已調(diào)節(jié)的固相萃取小柱吸附，用10%甲醇水2ml沖洗固相萃取小柱，用50%甲醇水1ml洗脫后收集備用。
     (7)樣品測定
吸取樣品溶液20μl進樣，進行HPLC分析，記錄六種抗生素的峰面積。根據(jù)6種抗生素的保留時間和紫外吸收光譜圖定性，峰面積定量。