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產品名稱 | 結直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
分類 | 細胞系 |
貨號 | GOY-01X0074 |
商品介紹：
名稱 結直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 別稱DLD 1; DLD1; CoCL3 種屬人類 年齡（性別）成人 組織來源結直腸腺癌上皮細胞 生長特性貼壁細胞 細胞形態上皮細胞樣 背景描述DLD-1細胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結直腸腺癌細胞株中的一株。在ATCC和其它地方進行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細胞與HCT-15細胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細胞和HCT-15細胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實，但染色體組型分析顯示它們缺乏染色體標記一致改變或數目上一致改變。DLD-1細胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達呈陽性(p53抗原產生了一個C→T點突變導致241位的Ser→Phe)。DLD-1細胞角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測。DLD-1細胞表達腫瘤特異性核基質蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細胞代數不明且污染了支原體，其后經過12周多種抗生素聯合培養處理，處理之后每周用Hoechst染色和標準培養法檢測。其后連續11個月不加抗生素培養，DLD-1細胞所有的檢測呈陰性。 生物安全等級1 生長培養基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~24-48小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 抗原表達情況Blood Type O. The cells are weakly positive for keratins and vimentin. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mutation re 基因表達情況carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3. |
使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的*培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；
4) 待細胞*貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。
培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
大鼠 TF 基因全長ORF克隆
大鼠 NET1 基因全長ORF克隆
大鼠 ARFGAP3 基因全長ORF克隆
大鼠 AK1 基因全長ORF克隆
大鼠 THTPA 基因全長ORF克隆
大鼠 EHD2 基因全長ORF克隆
大鼠 ALDH9A1 基因全長ORF克隆
大鼠 MRPL45 基因全長ORF克隆
大鼠 ENO1 基因全長ORF克隆
大鼠 PNPLA3 基因全長ORF克隆
結直腸腺癌上皮細胞：DLD-1 300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存
DTNB 肌萎Dystrobrevin β蛋白抗體 規格: 0.2ml
Transaldolase 1 轉醛醇抗體 規格: 0.2ml
UGT1A9 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移1A9 規格: 0.2ml
DPY19L2 DPY19L2蛋白抗體 規格: 0.2mllaminin 層粘連蛋白抗體 規格: 0.1ml
phospho-HSF1(Ser303) 磷酸化熱休克因子1抗體 規格: 0.2mlPAR-1/Thrombin receptor 蛋白激活受體-1抗體 規格: 0.1ml
Phospho-ATRIP (Ser224) 系統性紅斑狼瘡先關蛋白TREX1抗體 規格: 0.1ml
200次 ADP/ATP發光法細胞活力檢測試劑盒 ADP/ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
PPHLN1 脈周蛋白1抗體（胃抗原蛋白Ga50） 規格: 0.2ml
GlyR alpha 1/2/3 受體alpha 1/2/3型抗體 規格: 0.1ml
CD147/TCSF/Emmprin 細胞外基質金屬蛋白誘導因子抗體 規格: 0.1ml
1瓶 HPAC細胞株 HPAC 低溫運輸和保存
