在實驗操作過程中，需特別注意以下幾點以確保檢測結果的準確性和實驗安全：

1. 樣本處理規范

血清或血漿樣本需避免反復凍融，離心后取上清液時應防止溶血或脂血干擾。若樣本存在沉淀物，需二次離心（3000rpm，10分鐘）后使用。采集后的樣本若不能立即檢測，應分裝保存于-20℃以下，避免反復凍融導致抗體效價下降。

2. 試劑平衡與質量控制

所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘，搖勻后垂直滴加，避免產生氣泡。每批次實驗必須設置質控品（陽性/陰性/臨界值），若質控結果異常需終止實驗并排查原因（如試劑失效、溫育時間不足等）。開封后的微孔板應密封保存于2-8℃，濕度低于60%的環境。

3. 溫育條件優化

使用恒溫箱時需校準溫度（37±1℃），建議預實驗驗證溫育時間。避免疊放反應板導致受熱不均，推薦使用震蕩模式（500-700rpm）以增強抗原抗體結合效率。顯色階段需嚴格避光，終止反應后10分鐘內完成OD值測定。

4. 交叉污染防范

不同樣本需更換吸頭，洗板時確保每孔注滿洗滌液（350μL/孔），浸泡30秒后拍干。建議使用多通道移液器提高洗板一致性。酶標儀讀數前需用無塵布擦拭板底，避免指紋或液體殘留影響光路。

5. 結果判讀要點

臨界值（Cut-off）=陰性對照均值+0.15，樣本OD值≥1.1倍臨界值判為陽性。對于灰區樣本（0.9-1.1倍臨界值），建議72小時后復測或送PCR確認。實驗記錄需包含原始OD值、計算過程及環境溫濕度數據。