紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜，來研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。

由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。

紫外分光光度計用途

1、檢定物質(zhì)

根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是吸收波長λ-max和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。在國內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的吸收波長和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。

2、與標準物及標準圖譜對照

將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。

3、比較吸收波長吸收系數(shù)的一致性

4、純度檢驗

5、推測化合物的分子結構

6、氫鍵強度的測定

實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。

7、絡合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定：

8、反應動力學研究

9、在有機分析中的應用

有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結構測定的科學，它是在有機化學和分析化學的基礎上發(fā)展起來的綜合性學科。

紫外分光光度計結構（如下圖）

紫外分光光度計使用注意事項

1、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素：

他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應定期加以校正。使用紫外分光光度計應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。

2、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一：

因此，使用紫外分光光度計必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。

3、紫外分光光度計儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，由維修工程師或在工程師指導下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作：

同時，將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑。最后，恢復原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護和對主要技術指標的簡易測試方法，自己經(jīng)常對儀器進行維護和測試，以保證儀器工作在狀態(tài)。

紫外分光光度計詳細操作流程及校準辦法

1、紫外可見分光光度計光度測量

在模式選擇屏幕中選擇＜1.Photometric光度＞選項，將顯示參數(shù)配置屏幕； 

用GOTOWL鍵設定測量波長；

按F2鍵設定進樣控制；

按START/STOP鍵時，測量開始，顯示測量屏幕；

如需做空白校正，應在測量前先設置空白樣品，然后，按AUTO-ZERO鍵，將測量值置為OABS（99%）；

2、紫外可見分光光度計校正

開機預熱10分鐘足矣；

放入黑塊和標樣（沒有的自己配），關閉蓋子；

校0；

把燈光對著黑塊，把透光度調(diào)0；

把燈光對標樣，將吸光度調(diào)到99%；

 3、參比溶液介紹

參比溶液又稱空白溶液。測量時用作比較的、不含被測物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線。有時，基體中，雖不含被測物質(zhì)，但含有別的物質(zhì)，這時必須保證其不影響測試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測物質(zhì)，此時必須經(jīng)過純化將其除去。否則將影響測定結果。

4、紫外可見分光光度計使用注意事項

1.開機前應先預熱15分鐘，然后開機自檢；

2.濕度要控制在75%左右，溫度在5～30度之間； 

3.儀器要穩(wěn)壓電源，接地要好。并且避免陽光直接照射；

5、常見故障及處理方法

光門不能關閉：修復光門部件，使其關閉；

透過率“99%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“99%”旋鈕；

儀器嚴重受潮：可打開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑；以上為紫外可見分光光度計的具體操作方法及使用注意事項，希望能給予您幫助；