【BK-PCR16D】山東博科儀器以客戶為中心,以服務為宗旨,以創新為動力。
儀器使用前的準備
儀器校準
定期對便攜式熒光定量PCR檢測儀進行校準是確保數據可靠的基礎。校準過程要嚴格按照儀器說明書進行,通常需要使用標準品或質控品。比如,使用已知濃度的核酸標準品,按照檢測流程進行操作,記錄儀器檢測出的結果,與標準品的實際濃度進行對比。如果檢測結果與實際濃度偏差較大,就需要對儀器進行調整,直至檢測結果準確可靠。
校準周期應根據儀器的使用頻率和環境條件來確定。如果儀器使用頻繁,或者處于高溫、高濕等惡劣環境中,校準周期應適當縮短,一般建議每月進行一次校準。
試劑與耗材檢查
確保使用的試劑在有效期內,且保存條件符合要求。例如,熒光定量PCR試劑通常需要在-20℃或-80℃冰箱中保存,運輸過程中也要使用干冰等保持低溫。使用前要檢查試劑的外觀,如有渾濁、沉淀或變色等情況,應停止使用。
耗材如反應管、移液器槍頭等要保證無菌、無污染。使用前可對反應管進行外觀檢查,確保無破損、無變形。同時,要使用與儀器配套的耗材,以保證檢測的準確性。
樣本采集與處理
規范樣本采集
樣本采集是影響檢測結果的關鍵環節。以采集血液樣本為例,要選擇合適的采血部位和采血方法。一般可選擇前腔靜脈或耳靜脈采血,使用一次性無菌注射器和采血管。采血過程中要避免溶血,因為溶血會釋放出血紅蛋白等物質,干擾PCR反應。
對于其他類型的樣本,如組織、唾液等,也要按照相應的規范進行采集。采集組織樣本時,要選取病變明顯的部位,避免采集到壞死組織;采集唾液樣本時,要讓被采集者充分漱口,減少食物殘渣和口腔細菌的干擾。
正確處理樣本
采集到的樣本要及時進行處理,防止樣本中的核酸降解。對于血液樣本,一般需要進行離心分離血清或血漿;對于組織樣本,要進行研磨、勻漿等處理,釋放出其中的核酸。
在樣本處理過程中,要注意防止交叉污染。使用不同的樣本處理工具,如移液器、離心管等,避免樣本之間的相互污染。同時,操作人員要佩戴手套、口罩等防護用品,防止自身攜帶的微生物污染樣本。
檢測過程控制
嚴格操作流程
按照儀器說明書和試劑盒的操作流程進行檢測,不得隨意更改步驟或參數。例如,在PCR反應體系中,要準確加入樣本、試劑和引物探針,控制好反應體系的體積和濃度。反應溫度和時間也要嚴格按照要求設置,如變性溫度一般為95℃左右,退火溫度根據引物的Tm值確定,延伸溫度一般為72℃左右。
在加樣過程中,要使用精確的移液器,確保加樣量準確。加樣時要小心操作,避免產生氣泡,因為氣泡會影響PCR反應的進行。
設置對照實驗
在每次檢測中,都要設置陰性對照、陽性對照和空白對照。陰性對照使用不含目標核酸的樣本,用于檢測試劑和操作過程中是否存在污染;陽性對照使用已知濃度的目標核酸樣本,用于驗證檢測系統的靈敏度和準確性;空白對照使用不含樣本和試劑的反應體系,用于檢測儀器和環境的本底信號。
如果對照實驗的結果不符合要求,如陰性對照出現陽性信號,說明檢測過程中存在污染,需要重新進行檢測。
儀器維護與保養
日常清潔
每次使用完便攜式熒光定量PCR檢測儀后,要及時進行清潔。用柔軟的干布擦拭儀器表面,去除灰塵和污漬。對于儀器的光學部件,如光源、檢測器等,要使用專用的鏡頭紙或無塵布輕輕擦拭,避免刮傷。
定期清理儀器的散熱孔和風扇,防止灰塵堵塞,影響儀器的散熱效果。可以使用吸塵器或小毛刷進行清理。
定期維護
定期對儀器進行全面的維護和檢查,如檢查儀器的電源、線路是否正常,儀器的各個部件是否松動或損壞等。如果發現儀器存在問題,要及時聯系專業維修人員進行維修。
按照儀器說明書的要求,定期對儀器進行性能測試和校準,確保儀器始終處于良好的工作狀態。
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