為了避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤,操作人員需要遵循一系列規(guī)范的操作步驟和維護措施。以下是一些具體的建議:
一、流動相的處理
1.過濾:應預先除去流動相中的任何固體微粒,可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器進行過濾。泵的入口都應連接砂濾棒(或片),輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
2.脫氣:防止流動相中的氣泡對系統(tǒng)造成不良影響,確保流動相的穩(wěn)定性。
二、泵的維護
1.及時清洗:在停泵過夜或更長時間的情況下,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。流動相不應含有任何腐蝕性物質,含有緩沖液的流動相不應保留在泵內。
2.防止空轉:泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完,避免空泵運轉磨損柱塞、缸體或密封環(huán)。
三、梯度洗脫的注意事項
1.溶劑互溶性:注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內混溶,超出范圍后就不互溶,使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時,還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
2.空白梯度洗脫:進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫,以辨認溶劑雜質峰。
3.粘度變化:混合溶劑的粘度常隨組成而變化,在梯度洗脫時需注意壓力的變化,防止超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。
四、六通閥的使用和維護
1.樣品過濾:樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾,以減少微粒對進樣閥的磨損。
2.閥芯轉動:轉動閥芯時不能太慢,更不能停留在中間位置,防止流動相受阻、泵內壓力劇增甚至損壞柱頭。
3.沖洗進樣閥:為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中,每次分析結束后應沖洗進樣閥。

五、色譜柱的使用和維護
1.避免反沖:色譜柱一般不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。
2.預柱和保護柱:選擇使用適宜的流動相(尤其是pH值),以避免固定相被破壞。可以在進樣器前面連接一預柱或保護柱,以保護分析柱。
3.調節(jié)流速:調節(jié)流速時應緩慢進行,避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。
六、儀器的校準和日常維護
1.定期校準:為了確保戴安高效液相色譜儀的穩(wěn)定性和準確性,應定期進行儀器校準,確保各項參數在規(guī)定范圍內。
2.日常維護:包括流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗等,應堅持進行,以防止色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等故障的發(fā)生。
七、樣品制備的注意事項
1.濃度:樣品的濃度應適中,避免過高或過低影響分離效果。
2.溶劑:應使用與液相色譜儀兼容的溶劑進行樣品溶解和稀釋。
3.過濾:樣品溶液應經過適當的過濾處理,以去除可能影響分離效果的雜質。
避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤需要從流動相處理、泵維護、梯度洗脫、六通閥使用和維護、色譜柱使用和維護、儀器校準和日常維護以及樣品制備等多個方面入手。操作人員應嚴格遵循操作規(guī)程和保養(yǎng)要求,確保實驗結果的準確性和儀器的長期穩(wěn)定運行。