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對(duì)照的目的是對(duì)檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控,因此我們按照檢測(cè)的流程對(duì)對(duì)照進(jìn)行梳理。常規(guī)熒光定量PCR的流程是:樣品采集-運(yùn)輸-樣品處理-核酸提取-反轉(zhuǎn)錄(RNA病毒)-擴(kuò)增-結(jié)果讀取。下面看看各個(gè)環(huán)節(jié)都可以使用哪些對(duì)照?
1、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照
陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照是指在相同的處理?xiàng)l件下,比如一份已知的感染樣品和一份已知的未感染樣品,都進(jìn)行了提取和擴(kuò)增最終獲得了陽(yáng)性結(jié)果和陰性結(jié)果。陰陽(yáng)性對(duì)照強(qiáng)調(diào)處理過程與樣品一致,并且有明確的預(yù)期結(jié)果。
2.擴(kuò)增對(duì)照
我們通常說的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照指的是擴(kuò)增試劑盒中附帶的不需要提取的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照,更準(zhǔn)確的定義應(yīng)該是擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照和擴(kuò)增陰性對(duì)照。擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照含有陽(yáng)性擴(kuò)增模板,擴(kuò)增陰性對(duì)照應(yīng)含有陰性擴(kuò)增模板(基質(zhì)核酸)。擴(kuò)增對(duì)照只能監(jiān)控每次擴(kuò)增過程中的擴(kuò)增系統(tǒng)是否正常,不能監(jiān)控采樣、提取和每份樣品的操作過程。如果是檢測(cè)RNA樣品的檢測(cè)試劑盒,其擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照使用質(zhì)粒,便無法監(jiān)控反轉(zhuǎn)錄過程。
3、內(nèi)標(biāo)(Internal Control,IC)
內(nèi)標(biāo)是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式,一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo),另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點(diǎn)是與靶序列共同擴(kuò)增,而其他的對(duì)照都是獨(dú)立擴(kuò)增。
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