一、流動相的要求
     液相色譜是樣品的組分在柱填料和流動相之間質量交換來達到分離的要求，所以實驗室要求流動相需要舉報下面幾個特點。

1、純度
  
  流動相需要按照規定使用HOLC的試劑。使用的時候過濾去除里面的顆粒性雜質或者一些別的物質。如果溶劑里面雜質過多，會導致色譜柱的壽命降低。


2、溶解度 
   
    樣品的溶解度需要合適，不能過大或者過小。如果溶解的樣品不好會導致柱頭沉淀，不光是影響分離還會導致色譜柱使用壽命降低。


3、粘度

粘度要低(應<2cp) ，高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。******選擇沸點在100℃以下的流動相。

4、樣品易于回收。應選用揮發性溶劑。

5、流動相PH 

采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。 

二、色譜泵的使用與維護

為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性，必須按照下列注意事項進行操作：  

1 防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相******在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。的濾器應經常清洗或更換。  

2 泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，***終產生漏液。    

3 的工作壓力決不要超過規定的******壓力，否則會使高壓密封環變形，產生漏液。

三、色譜柱的使用與維護

在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。 

1 柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產生空隙。

2 如果儀器用來做常規分析，樣品種類有限，但分析次數多，則不妨為每一類常規分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。 

3 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。 

4 應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。 

5 如使用柱溫控制裝置時，應注意在通人流動相后才能升溫。

6 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。 

7 選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一個預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。 

8 避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。 

9 經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規分析需要50-75mL。 

10 保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發干燥。******禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。 

11 色譜柱在使用的時候，如果壓力突然增高，可能是燒結濾片堵塞，這個時候應該考慮清洗濾片或者更換濾片。還有一種可能***是大分子進入了色譜柱里面，。導致色譜柱柱頭污染。如果柱效降低或者色譜峰變形，那么可能回事柱頭塌陷或者死體積過大。  

12 在完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對色譜分析系統進行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內的雜質。