色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是好的條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

1.樣品的前處理：

（1）使用流動相溶解樣品；

（2）使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)；

（3）使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)；

2.流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此，要求流動相具備以下的特點(diǎn)：

（1）流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

（2）流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

（3）流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時，降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

（4）流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)，如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

（5）流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

（6）在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3. 流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求柱效，使用流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8mL/min為佳。當(dāng)選用流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如，使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

4. 流動相使用注意事項(xiàng)：

（1）由于甲醇廉價(jià)，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。

（2）對于正相柱推薦使用沸程為30-60 ℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。

（3）含水流動相在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入，防止細(xì)菌生長。

（4）流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

（5）使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。