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高效液相色譜中常用的柱前衍生化方法
紫外衍生化反應(yīng)
液相色譜使用最多的是紫外檢測(cè)器，為了使一些沒(méi)有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測(cè)器檢測(cè)，往往通過(guò)衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)：2,、苯甲基、對(duì)硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、對(duì)甲苯酰、對(duì)氯苯甲酸制、對(duì)硝基苯甲酸酯、對(duì)甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、對(duì)溴苯甲酰甲基，這些衍生物可被紫外檢測(cè)器檢測(cè)。
大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來(lái)自經(jīng)典的光度分析和有機(jī)定量分析，新的衍生化反應(yīng)和衍生化試劑是隨液相發(fā)展而發(fā)展的，這些反應(yīng)的原理都來(lái)自有機(jī)合成，所以就要求操作者對(duì)有機(jī)合成有所了解。但是，由于柱前衍生化是為色譜分析準(zhǔn)備樣品，處理樣品的量小（mg級(jí)），所用的小型和微型反應(yīng)器皿又不同于常量的有機(jī)合成，而是類似于近年來(lái)發(fā)展的微量有機(jī)合成。紫外衍生化反應(yīng)要選擇反應(yīng)產(chǎn)率高、重復(fù)性好的反應(yīng)。過(guò)量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果干擾下一步的色譜分離和檢測(cè)，則在色譜進(jìn)樣前要進(jìn)行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對(duì)紫外吸收的影響。
（1）苯甲酰化反應(yīng)：苯甲酰氯及其衍生物--對(duì)硝基苯甲酰氯、3,5-二甲酰氯和對(duì)甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng)，生成紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物；
（2）2,4-二硝基氟代苯（DNFB）的反應(yīng)：DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率很低，但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng)，生成強(qiáng)紫外吸收的苯胺類衍生物；
（3）苯基異硫氰酸酯（PITC）的反應(yīng)：PITC可與氨基酸反應(yīng)，生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸；
（4）苯基磺酰氯的反應(yīng)：苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)。
甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應(yīng)，不僅能提高它們的檢測(cè)靈敏度，還可改變HPLC的分離度。
（5）有機(jī)酸的酯化反應(yīng)：有機(jī)酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯，常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對(duì)溴基苯甲酰溴和對(duì)硝基苯甲酰溴等；
酯化反應(yīng)在極性溶劑（如乙腈、丙酮或四氫呋喃）中進(jìn)行，有時(shí)需要加催化劑，如冠醚加鉀離子、二乙胺或N-二異丙基胺等。
（6）羰羥基化合物的反應(yīng)：醛類和酮類中的羰基可與2,肼（DNPA）反應(yīng)，反應(yīng)在弱酸性條件下進(jìn)行，生成苯腙衍生物。
羰基化合物還可以與對(duì)羥胺（PNBA）在堿催化下反應(yīng)，生成有強(qiáng)紫外吸收的肟。
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