一、血清滅活問題。

1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實驗了。

2、問：Gibco胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞，如內(nèi)皮細胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問：我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？

答：進口的一般都已滅活，國產(chǎn)的不一定，務必還是滅活一下再用較安全。

4、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影 響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染，正確嗎？細胞是單核細胞白血病細胞， 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結(jié)合過程的干擾，一般是2-6小時，根據(jù)細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活 ！這要根據(jù)實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。

5、問：(1)我買的是Gibco北美胎牛血清，要滅活嗎？有些說法是需要，有些說直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中；我配制*液，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，因為有兩個作用，是滅活補體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處 理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。

我在實驗室處理血清的時候，有一次水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀 ，我重新處理了另外一份血清，將兩份血清對比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以 上，肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機會我做個延長滅活時間的實驗試試，看看到底有多大的影響。熱 滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會有沉淀產(chǎn)生，這常常會被認為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到 底有沒有污染，常常又會把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會進一步析出，后還是要做鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗 ，和革蘭氏染色試驗，非常麻煩。

我看過一份資料，里面提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間， 而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高 ，許多早先認為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效 性和必要性。有人比較過11個不同細胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細胞，MRC-5) 的生長帶來負面影響，三個細胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個細胞株(Balb/3T3， Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細胞的生長沒 有明顯的促進作用。

你可以摸索一下，血清從-20℃冰箱拿出來之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活 ，比較這兩種血清對細胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個過程多也就一個星期。同時你還要考慮 血清滅活與否對你后續(xù)的實驗有沒有影響。

問：(2)分裝后的血清從-20℃取出放4℃讓其液化，卻見血清比較混濁，有沉淀產(chǎn)生，這屬正常嗎？

答：正常。