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細胞凋亡檢測可按哪些種類劃分?

來源:上海莼試生物技術有限公司   2018年06月07日 14:54  

細胞凋亡檢測死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合,是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。

在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸,細胞變園,細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內質網和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過程中細胞內容物并不釋放到細胞外,不會影響其它細胞,因而不引起炎癥反應。

在生物化學上,多數細胞凋亡的過程中,內源性核酸內切酶活化,活性增加。核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數的各種片斷。如果對核DNA進行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數的DNA ladder(梯狀帶紋)的特征。

相比之下,壞死是細胞處于劇烈損傷條件下發生的細胞死亡。細胞在壞死早期即喪失質膜完整性,各種細胞器膨脹,進而質膜崩解釋放出其中的內容物,引起炎癥反應,壞死過程中細胞核DNA雖也降解,但由于存在各種長度不等的DNA,不能形成梯狀帶紋,而呈彌散狀。

一些溫和的損傷刺激及一些抗腫瘤藥物可誘導細胞凋亡,通常這些因素在誘導凋亡的同時,也可產生細胞壞死,這取決于損傷的劇烈程度和細胞本身對刺激的敏感程度。

三尖杉酯堿(HT)是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病,急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內作用2小時,即可誘導HL-60細胞凋亡,并表現出典型的凋亡特征。本實驗用1μg/ml HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡,同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)對細胞進行雙重染色,可以區別凋亡、壞死及正常細胞。

細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質膜。當細胞壞死時,質膜不完整,PI就進入細胞內部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,細胞凋亡檢測和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質,可跨膜進入活細胞,因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱,它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結合(主要結合于A-T)堿基區),顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。

1 x 10^6 cells/vial 大鼠腦脊神經元 RN-r

1 x 10^6 cells/vial 大鼠皮質神經元 RN-c

1 x 10^6 cells/vial 大鼠顆粒細胞 RGC

1 x 10^6 cells/vial 大鼠海馬神經元 RN-h

1 x 10^6 cells/vial 大鼠黑質神經元 RN-sn

1 x 10^6 cells/vial 大鼠紋狀體神經元 RN-s

1 x 10^6 cells/vial 大鼠腹脊髓神經元 RN-vsc

1 x 10^6 cells/vial 大鼠背脊髓神經元 RN-dsc

5 x 10^5 cells/vial 大鼠少突膠質前體細胞 ROPC
細胞凋亡檢測

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