我公司技術(shù)專員特意為大家準(zhǔn)備十幾條ELISA操作的重點(diǎn)細(xì)節(jié)，閱讀之后可以總結(jié)一下您在實(shí)驗(yàn)中有哪些重點(diǎn)被忽略掉了。熱愛ELISA實(shí)驗(yàn)的新手們需注意這些細(xì)節(jié)：

1.不管是試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在使用之前我們都要仔細(xì)閱讀說明書。

2.同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。

3.按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。

4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。

5.ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

6.標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

7.一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

8.根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。

10.選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對(duì)。

11.為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

13.當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。

14.準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。

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