親和層析填料是利用生物分子間所具有的專一性親和力而設(shè)計的層析技術(shù)，常用于從復雜性高、難度大的進料流中捕獲目標產(chǎn)物,是純化病毒載體的理性型。但是，病毒載體純化對親和層析填料的要求也非常高，主要是由于病毒載體的滴度低、雜質(zhì)水平高、敏感性強、粒徑可變性大，這都給選擇哪種親和層析填料帶來了不小的難度，包括層析基質(zhì)（填料/整體柱/膜/纖維）和配基的選擇難度也不小。

一、病毒載體純化在親和層析填料選擇上的“攔路虎"
1.病毒載體的敏感性性強
在強酸、強堿、高鹽、低鹽、高剪切等環(huán)境條件下，病毒載體高度敏感，這對親和層析填料的配基的選擇帶來了難度。親和層析填料的配基跟目標病毒載體良好結(jié)合后，在相對溫和的洗脫條件下，才可能避免在純化過程中病毒顆粒由于PH的變化所導致的感染性喪失的問題。

2.病毒載體的粒徑可變性大

病毒載體的類型不同，大小也不相同，一般大小在20 到 200 nm的范圍內(nèi)，有些病毒載體可能更大，如溶瘤病毒。病毒載體的粒徑越大，親和層析填料的動態(tài)結(jié)合載量 (DBC)越小，所以需要更大的柱-親和層析系統(tǒng)來進行純化，這勢必會增加成本。

3.病毒清洗和消毒的問題

病毒載體的敏感性、粒徑的可變性，在去除生物負荷這個問題上，也會產(chǎn)生不小的難度，因為一些用作親和層析調(diào)料的配基是蛋白質(zhì)或者肽，它們與在線滅菌 (SIP) 方案可能存在不兼容的地方。因此，病毒清洗和消毒對配基的選擇上的重要性不言而喻。
二、病毒載體的親和層析填料的商業(yè)化情況
1. 病毒載體的親和層析填料商業(yè)化的挑戰(zhàn)
病毒載體的親和層析填料商業(yè)化具有兩大挑戰(zhàn)：一、目標較大的產(chǎn)物可能會產(chǎn)生較低的產(chǎn)能。因為，目前的親和填料通常是為抗體的最佳工藝而設(shè)計的,粒徑大多在 10-15 nm左右，但是許多病毒載體的粒徑較大，如腺病毒為90-100nm、 γ - 逆轉(zhuǎn)錄病毒為80-100nm，根本無法進入孔內(nèi)與基球進行結(jié)合，導致產(chǎn)能降低。二、親和層析填料通常必須特定于某種病毒載體，對于 AAV ，還必須是特定的血清型（AAV2、AAV8、AAV9 等）。這就意味著這一類別的填料的應(yīng)用困難，病毒載體生產(chǎn)商很難使用單一親和層析填料為一系列載體構(gòu)建平臺純化工藝。

2.AAV親和層析填料商業(yè)化情況

目前，市面上的AAV親和層析填料的類型主要有：血清特異型和非特異型。對于血清特異型，都需要進行優(yōu)化和篩選，從而找到對血清特異型能很好地與親和配基結(jié)合的填料。
但是病毒載體的情況越來越復雜，就會存在與現(xiàn)有的親和配基不結(jié)合的情況。因此，親和層析填料的生廠商把眼光又轉(zhuǎn)移到了基于電荷的平臺化方法上來，這種方法能降低成本、兼容SIP和CIP工藝、跨血清型靈活。
三、AAV親和層析填料的新方案
英國Biotoolimics推出了針對AAV的親和層析填料：ViralPolish^TM 5000B，該產(chǎn)品包含雙層瓊脂糖珠（含惰性外殼），孔徑大小受到嚴格控制，內(nèi)部多功能配體可快速高容量結(jié)合雜質(zhì)。ViralPolish^TM 5000B親和層析填料專門為溫和洗脫條件下，AAV而設(shè)計，在不犧牲動態(tài)結(jié)合載量的情況下提高堿穩(wěn)定性。

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病毒載體在親和層析填料上的新選擇

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