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PCR是怎樣完成擴增的呢?PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction),實驗過程是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物的共同參與下,將該段DNA擴增至足夠的數量,以便進行結構和功能的分析。
若我們想要分析/探索基因的遺傳信息,則需要大量的DNA片段,例如動物的組織;兇手的毛發、血液、皮膚;古生物;歷史殘?。换颊叩慕M織等,可能只能分離出少量的DNA,若想研究其遺傳信息,有著很大的阻礙和困難,在1985年,出現了一種方法:可以在短時間內大量復制DNA片段,此方法為PCR,它能將很微量的遺傳物質在數小時內擴增數百倍達到檢測水平,那么PCR是怎樣完成擴增的呢? 讓我們來一起學習一下吧!
1.高溫變性
變性的目的是使模板DNA雙鏈解旋成為單鏈以便與引物結合。此步驟將溶液加熱至94-98C并保持20-30秒,破壞兩條鏈之間的氫鍵并生成單鏈 DNA 分子;同時也激活了DNA 聚合酶,該步驟的時間取決于所使用的聚合酶。
2.低溫退火
退火溫度取決于所用引物的Tm,一般比引物Tm低3-5C左右。該步驟將持續約 20-40 秒,當反應溫度隆低到50-65C時,引物與互補的DNA單鏈序列形成氫鍵,DNA聚合酶會結合至引物-模板雙鏈處開始DNA合成。
3.中溫延伸
延伸時間取決于目的DNA片段的長度和DNA聚合酶的合成能力。一般而言DNA聚合酶每60秒能夠合成1kb長度的DNA。DNA模板-引物結合物在Taq DNA聚合酶的作用下,沿著5’一3’的方向合成一條與模板DNA鏈互補的鏈。延伸時的溫度通常為72C。
以上就是關于PCR是怎樣完成擴增的問題解答,如果有更多關于PCR技術的問題,歡迎大家給小編留言~
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