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小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法

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更新時間:2017-08-08 16:27:47瀏覽次數(shù):154次

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產(chǎn)地 進(jìn)口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。

產(chǎn)品名稱:小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱:Mouse pulmonary artery endothelial cell culture medium
規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號:FS-X0447
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長滿(90%以上)請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉?/a>。

小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

Isochlorogenic acid B    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
異綠原酸C(4,5-二咖啡酰奎寧酸)    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Isochlorogenic acid C    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
1-咖啡酰奎寧酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    1-caffeoylquinic acid    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
洋薊素(1,3-二咖啡酰奎寧酸)    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Cynarin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
1,5-二咖啡酰奎寧酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    1,5-Dicaffeoylquinic acid    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
巴馬汀(*,棕櫚堿)    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Palmatine    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Hesperidin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
新*    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Neohesperidin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
柴胡皂苷B    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    SaikosaponinB    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
橙皮素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Hesperitin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
*內(nèi)酯    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Andrographolide    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
甘草酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Glycyrrhizic acid    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
甘草次酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Glycyrrhetinic acid    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
*鹽    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Monoammoniumglycyrrhizinate    含量:    HPLC≥99%    規(guī)格:    20mg/支
甘草苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Liquiritin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
異甘草苷    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    neoisoliquritin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
甘草素/甘草醇    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Liquiritigenin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
大黃酸    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Rhein    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
大黃素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Emodin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
大黃素甲醚    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Physcion    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
大黃酚    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Chrysophanol    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
蘆薈大黃素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Aloeemodin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支
小鼠肺大動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法楊梅素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Myricetin    含量:    HPLC≥99%    規(guī)格:    20mg/支
二氫楊梅素    進(jìn)口/國產(chǎn)    英文名稱    Dihydromyricetin    含量:    HPLC≥98%    規(guī)格:    20mg/支

 

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