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大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法

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所  在  地上海市

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更新時(shí)間:2017-08-08 14:26:17瀏覽次數(shù):215次

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產(chǎn)地 進(jìn)口 加工定制
適用領(lǐng)域 科研
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法,冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。

產(chǎn)品名稱:大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法
英文名稱:Rat pulmonary vein endothelial cells culture medium compley
規(guī)格:100mL
產(chǎn)品貨號(hào):FS-X0324

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法收到后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
培養(yǎng)操作流程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K,GIBCO,貨號(hào)21127-022),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;
      1,細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml*,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

氯磺隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):64902-72-3 100mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氯酞酸甲酯 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):1861-32-1 250mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
克氯得標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào): 84332-86-5 10mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
環(huán)蟲(chóng)酰肼標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào): 143807-66-3 1ml    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
吲哚酮草酯 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):142891-20-1 100mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
醚磺隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):94593-91-6 100mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
* 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):100mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
克拉維酸鋰 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):200mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
克侖特羅標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
烯草酮 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào): 99129-21-2 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
炔草酯 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):105512-06-9 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
四螨嗪 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):74115-24-5 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
異惡草酮 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):81777-89-1 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氯甲酰草胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):84496-56-0 1ML    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
調(diào)果酸標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào): 101-10-0 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
二氯皮考啉酸標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):1702-17-6 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
解毒喹 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):99607-70-2 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氯酯磺草胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):147150-35-4 10ML    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氯舒隆 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):60200-06-8 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氯氰磺柳胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):57808-65-8 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
鄰氯*標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào): 7081-44-9 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
大鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作方法粘菌素鹽酸鹽 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):1264-72-8 100mg    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
氰胺 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):420-04-2 100MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱        含量:        規(guī)格:    20mg/支
草凈津 標(biāo)準(zhǔn)品  號(hào):21725-46-2 250MG    進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)    英文名稱

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