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RNA 電泳液 ,10×250mL保存

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更新時(shí)間:2017-07-14 12:27:39瀏覽次數(shù):149次

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RNA 電泳液 ,10×250mL保存使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

RNA 電泳液 ,10×250mL保存詳細(xì)介紹:

RNA 電泳液 ,10×250mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
RNA 電泳液 ,10×250mL保存使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
RNA 電泳液 ,10×250mL保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
草魚腎細(xì)胞;GIK

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0262BE(2)-M17(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

HCC細(xì)胞,子宮高分化鱗癌細(xì)胞 T淋巴瘤細(xì)胞Jurkat亞系,Jurkat77細(xì)胞 人癌細(xì)胞;MDA-MB-157

786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

IL8 Others Human IL-8 (aa 6-77) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
PRKAR1A Others Human PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞cDNAHN-h cDNA

T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795

HCCC-9810細(xì)胞,人肝癌亞力山大細(xì)胞 APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,7WCY1.0細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2

Lec1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Different. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)性分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml
人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞cDNAHN-h cDNA

PRKAR1A Others Human PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

T739小鼠肺腺癌瘤株;LA795

HCCC-9810細(xì)胞,人肝癌亞力山大細(xì)胞 APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,7WCY1.0細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2

Lec1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Different. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)性分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml
Anti-Rad51/FITC 熒光素標(biāo)記Rad51抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg

kappa型受體抗體 Anti-κOR 1ml

SLC33A1 英文名稱: 乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 0.2ml

FGF16 英文名稱: 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子16抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-PLK1(Ser482+Ser486+Ser490) 磷酸化絲/*蛋白激酶Plk1抗體 規(guī)格 0.1ml

Beta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg
Rabbit Anti-Monkey IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml

Phospho-c-Fos (Ser32) 英文名稱: 磷酸化c-fos抗體 0.1ml

細(xì)胞角蛋白18抗體 Anti-CK18 0.1ml

Anti-OXR /FITC 熒光素標(biāo)記整合素樣金屬蛋白酶與*1-7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PIWIL4 piwi4蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-rabbit IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗兔IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
RNA 電泳液 ,10×250mL保存IL-1 Alpha 小鼠白介素-1αMulti-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-EphA2/Eph receptor A2 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白*激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh MtTF1 線粒體轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.2ml

HLA-A(Human leukocyte antigen A) ELISA Kit 人類白細(xì)胞抗原A 96T

SRCAP 英文名稱: 轉(zhuǎn)綠激活蛋白SRCAP抗體 0.2ml

CD36 英文名稱: CD36抗體 0.1ml

Anti-EphA2/Eph receptor A2 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白*激酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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