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更新時間:2017-07-10 10:05:25瀏覽次數(shù):146次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)膜蛋白純化試劑盒100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
膜蛋白純化試劑盒100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
膜蛋白純化試劑盒100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
IL8 Protein Human 重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77, Fc 標簽)
人尿道上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人細胞裂解液 (陽性對照)
Neuro-2a細胞,小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 MDA-MB-231(癌細胞) 人腦瘤細胞;SF767
人羊膜細胞;WISH
SP2/0(小鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 ANTXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照)
CM-M020小鼠上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細胞裂解液 (陽性對照)
前脂肪細胞培養(yǎng)基PAM
HCC 94細胞,人子宮鱗癌細胞(高分化) 小鼠骨髓瘤細胞,Fox-NY細胞 人雪旺細胞HSC
hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞) 5×106cells/瓶×2
hMo-PB single 人類外周血單核細胞團塊單一來源,超純 > 1 mio.cells 人小腦顆粒細胞RNAHCGC miRNA5 μg
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照)
人腎臟上皮細胞HREpiC
IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞
CM-H115人腦動脈血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL
U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細胞
人細胞;Hela 人晶狀體上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠*Ⅲ(FⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*/*蛋白激酶PAK4(PAK4)免疫試劑盒 Human Serine/threonine-protein kinase PAK 4,PAK4 ELISA kit
漆酶試劑盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISA試劑盒大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanlymphocytefunctionassociatedantigen2,LFA-2ELISA試劑盒人淋巴細胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanparaoxonase,PONELISAKit人對氧磷酶(PON)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
山羊白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒
HumanGlutathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 人*過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanheatshockprotein27,HSP-27ELISA試劑盒人熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織輔酶Q含量比色法定量檢測試劑盒20次
Humanmatrixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
膜蛋白純化試劑盒100T實驗方法大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠型乙酰*受體(N-AChR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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