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上海莼試生物技術有限公司
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ATCC細胞染色體制備過程

時間:2018/5/15閱讀:721
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組織ATCC細胞用于遺傳學分析zui常見的是體外培養的細胞株,多為惡性腫瘤細胞株,且呈貼壁生長,僅小數細胞株為懸浮生長。培養細胞有來源易得、細胞分裂率高和染色體標本制出清晰度高等優點。組織細胞培養基染色體制備的關鍵是掌握好體外細胞的生長動態,只有處在對數生長期的細胞才能出現較高的分裂相,所以積水仙素處理的時機及量是染色體標本形態及分裂指數的關鍵。

1、實驗材料

培養基液(PRMI 1640、M199、DMEM等),小牛血清、0.025%胰蛋酶、秋水仙素,刻度離心管,直吸管及彎頭吸管,培養瓶或皿、KCL、甲醇、冰乙酸、載玻片。

2、培養液配制

培養液85-95%

小牛血清5-15%

雙抗(選擇)100u/ml

3、操作過程

(1)培養基細胞:選擇處于指數生長期、用大瓶培養的80-90%匯合單層培養細胞;

(2)終止培養:當有大量圓形發亮細胞出現時,加秋水仙素0.01-0.03ug/ml培養混合液,置溫箱繼續培養6-10小時以抑制分裂期細胞停止于分裂中期;

(3)聚集細胞:

(A)搖動法:

可利用分裂中期細胞培養基變圓與底物附著不牢特點,此時可持培養瓶,左右反復橫向水平搖動,可使90%的中期分裂細胞從瓶壁脫落;

(B)消化法:

將培養液倒入離心管內,給培養瓶內加0.025%*液0.5-1ml/瓶,水平左右搖動,便培養瓶底壁面*接觸消化酶,稍后用彎頭吸管吹打,待細胞*脫落后,加入3-5ml前培養終止消化。用吸管移入裝有培養基液的離心管內2000rpm10分鐘。棄上清液,留沉淀細胞;

(4)低滲處理:給沉淀細胞加頂溫的37℃0.075MKCL8ml左右,用吸管打均勻,在溫箱中靜置20-30分鐘;

(5)預固定:向低滲處理適當的離心管中加新鮮配制的3∶2甲醇,冰乙醇固定液1-2ml,用吸管輕松吹打調勻,此措施能起到使細胞表面輕微固定,可防止固定后細胞培養基粘連成塊。

(6)固定:800-1000rpm10分鐘,棄上清液加新鮮配制的3∶2甲醇冰乙酸固定液10ml,加入時要沿管壁慢慢加入,后輕輕吹打,封口后室溫靜置30分鐘以上,反復三次;

(7)制片:末次離心后,倒掉上清液,留沉淀ATCC細胞,加新鮮配制固定液0.5ml左右,混勻后*制片,其它同外周血方法。

Diethylcarbamazine Citrate 200mg 枸櫞酸乙胺嗪標準品 1642-54-2

Paramethasone Acetate 200mg 醋酸帕拉米松標準品 1597-82-6 

Sodium Iron EDTA 200mg 乙二胺四乙酸鐵鈉標準品 15708-41-5 

Drometrizole Trisiloxane 200mg 甲酚曲唑三硅氧烷標準品 155633-54-8

Methscopolamine Bromide 200mg *標準品 155-41-9 

Ritonavir 200mg *標準品 155213-67-5 

Pancuronium Bromide 200mg 泮庫溴銨標準品 15500-66-0 

Tripelennamine Hydrochloride 200mg 鹽酸曲吡那敏標準品 154-69-8 
ATCC細胞

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