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上海莼試生物技術有限公司
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人源細胞實驗結果誤判原因

時間:2018/3/1閱讀:157
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人源細胞提供的對實驗結果判定說明是接種細菌于37℃培養24h,滴加V-P甲、乙液后在30min內觀察結果,變紅色為實驗陽性,不變色為陰性。然而在實際工作中,此方法會造成一些實驗結果的誤判,并不是所有的細菌都適用上述判定方法。
V-P實驗常用于細菌檢測,可檢驗細菌利用葡萄糖產生中性乙酰甲基甲醇的能力,在堿性環境下,乙酰甲基甲醇被空氣中氧氣氧化成二乙酰,二乙酰與培養基內蛋白胨中*所含有的胍基反應可生成紅色化合物。
蠟樣菌V-P培養基培養24h,滴加甲、乙液后30min內呈現陽性,證明試驗用V-P培養基無質量問題。單增菌V-P培養基分別于30℃和37℃培養24h、48h、72h、96h,實驗結果如下表。通過實驗我們發現兩種現象。其一,單增菌培養的時間短,出現陽性結果慢,隨著培養時間延長,陽性結果出現的時間縮短。其二,48h內,單增菌于30℃培養要比在37℃培養陽性結果出現的快些。
究其實驗原理,V-P實驗顯色不同于糖醇類培養基顏色變化,因其中所含指示劑變化特別靈敏。該實驗zui終出現紅色物質與二乙酰的含量有直接關系,二乙酰含量大,它與胍基生成的紅色物質就多,觀察到培養基顯紅色的速度就快,二乙酰含量少則反之。試驗中,隨著培養時間的延長,單增菌利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量越來越多,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰的含量也就越來越多,從而陽性結果顯現的時間隨之縮短。相對于37℃,單增菌于30℃培養更適宜生長,并且在相同的培養時間內,其利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量更多些,尤其48h內表現得更為突出。
人源細胞大量的實際工作中發現,有些細菌的生化實驗不應*按照試劑盒說明書的方法去做,應參考其生物學特點,在必要時做出適當的調整,才能得到更加可信、滿意的實驗結果。正如上述實驗,若按試劑盒提供的結果判定說明,培養72h內的陽性結果均超過30min,理應判定為陰性,而單增菌更適宜于30℃生長,且生長緩慢,從而V-P實驗需要適當的延長培養時間,4h內觀察結果為宜,所以不能輕易地判定為陰性。
40957-83-3     Glycitein    黃豆黃素標準品    15mg
40246-10-4     Glycitin    黃豆黃甙標準品    15mg
33996-58-6     Levetiracetam Racemic Mixture     *外消旋混合物標準品    15mg
    N-Demethylazithromycin    n-去甲基*標準品    15mg
    Neotame Related Compound A    紐甜相關物質A標準品    15mg
    Open Ring Aztreonam    開環*標準品    15mg
6233-83-6     Oxytocin Identification    羥可待酮鑒別標準品    15mg
    Piroctone Related Compound A    吡羅克酮相關物質A標準品    15mg
206184-49-8     Tenofovir     泰諾福韋標準品    15mg
    Tiagabine Related Compound A    噻加賓相關物質A標準品    15mg
3569/10/6    Valerenic Acid    纈草烯酸標準品    15mg
32911-62-9     Withanolide A    睡茄交酯 A標準品    15mg
人源細胞

 

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