當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>ATCC細胞傳代后多久能轉(zhuǎn)染?
常見的實驗室ATCC細胞傳代方法有貼壁細胞用消化法傳代和懸浮生長的細胞采用離心分離后傳代。貼壁細胞消化時,因細胞對*的敏感程度不同,所以消化時間差別較大。對于初學(xué)者,消化的程度也很難掌握好,加入適量*,輕輕搖晃3-4次(使細胞充分與*接觸),隨即吸取*,放于培養(yǎng)箱消化,數(shù)分鐘后取出,輕拍培養(yǎng)瓶,見細胞自瓶壁滑下即可,若沒,繼續(xù)消化。
細胞轉(zhuǎn)染是指取對數(shù)生長的細胞,接種于培養(yǎng)板,加培養(yǎng)液,培養(yǎng)過夜(細胞長至85-90%滿);按說明書進行轉(zhuǎn)染實驗。轉(zhuǎn)染時應(yīng)注意預(yù)備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無血清下進行。在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基,可提高轉(zhuǎn)染效率,但所用培養(yǎng)基必須37℃預(yù)溫。 脂質(zhì)體/ DNA混合物應(yīng)當(dāng)逐滴加入,盡可能保持一致,從培養(yǎng)皿一邊到另一邊,邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。
對于細胞轉(zhuǎn)染,一般在細胞中期轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率會相對高一些。這個時候的細胞狀態(tài)是的。對于HEK293T來說,一般轉(zhuǎn)染的時間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr,外源基因肯定是有表達的。至于72hr,應(yīng)該也還是有表達的,ATCC細胞可能表達量會很低,主要是這個時間點的細胞大部分都衰老了。建議293T收集細胞,在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。
YSRIBIO012 Zidovudine *標(biāo)準(zhǔn)品 30516-87-1 400mg
YSRIBIO013 Zalcitabine Related Compound A 扎西他濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 7481-88-1 50mg
YSRIBIO014 Zalcitabine 扎西他濱標(biāo)準(zhǔn)品 7481-89-2 200mg
YSRIBIO015 Yohimbine Hydrochloride 鹽酸育亨賓標(biāo)準(zhǔn)品 65-19-0 200mg
ATCC細胞
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