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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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干細(xì)胞解凍培養(yǎng)技巧分析

時間:2017/6/8閱讀:506
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說明
1.經(jīng)過冷凍保存后的干細(xì)胞,其生存率會下降,冷凍時之冷卻速度,保存溫度,解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。
2. 一般而言,4℃以下慢慢地冷凍,保存于液態(tài)氮中(-196℃)。
3. 37℃快速解凍。
4.保護(hù)劑(抗凍劑):添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。
5.有些細(xì)胞如果采用上述的方法時,無法得到高的存活率。此時,則必需考慮可能傷害細(xì)胞的機(jī)制,添加劑之作用等而來找出適當(dāng)?shù)臈l件來修正。

材料 :
1.增殖期之細(xì)胞 (9成滿),培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中數(shù)個。
2.冷凍用培養(yǎng)基(2倍) : 培養(yǎng)基內(nèi)加入三倍血清及15% DMSO,保存在冰箱中。
3. 冷凍管、保利龍制容器、鋁制ample支持棒。

步驟:
1.準(zhǔn)備2 x 107cells/ml的干細(xì)胞懸浮液。
2.冷凍用培養(yǎng)基(2倍) :以微溫水溶解DMSO,在培養(yǎng)基中混合為15% (v/v)。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前在行配制,配好后放在冰箱中,使用量必須和細(xì)胞懸浮液的量相等;使用時維持在4℃。
3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml (1/2冷凍管體積)冷凍用培養(yǎng)基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的細(xì)胞懸浮液;等量混合。將蓋子扭緊后,在管中部貼上膠帶密封。
4.記載卷標(biāo) : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫明細(xì)胞名稱、代數(shù)、冷凍的年,月,日等所需要的項(xiàng)目。
5.放進(jìn)冷卻的保利龍容器中,而在- 80℃的超低溫槽中放置一個晚上。
6.干細(xì)胞放進(jìn)液態(tài)氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管,迅速地放進(jìn)容器內(nèi)。

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