人永生化表皮細胞(HaCat)
細胞介紹
該細胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細胞交聯外膜蛋白、中間絲相關蛋白陽性。
細胞特性
1.來源：正常表皮細胞
2.形態 ：上皮細胞樣，貼壁生長
3.含量：>1x10 6個/mL
4.污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5.規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入*使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
人永生化表皮細胞(HaCat)細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養步驟
一． 培養基及培養凍存條件準備：
1）準備 DMEM培養基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理 ：
1） 復蘇細胞：將含有 1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4ml培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
人永生化表皮細胞(HaCat)注意事項：
1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
