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強推ELISA試劑盒檢測新原理

閱讀:375發布時間:2018-1-24

ELISA試劑盒檢測法是免疫確診中的一項新技術,現已成功地運用于多種病原微生物所致使的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫確診。也已運用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,依據現已運用的效果,以為ELISA法具有活絡、特異、簡略、敏捷、安穩及易于自動化操作等特征。不只適用于臨床標本的查看,并且由于一天以內能夠查看幾百甚至上千份標本,因而,也適合于血清盛行病學查詢。本法不只能夠用來測定抗體,并且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種前期確診的超卓方法。因而ELISA法在生物醫學各領域的運用規劃日益擴展。
ELISA試劑盒檢測可概括四個方面:
A.?定量查看體液中抗原或抗體成份。
B.?研討抗酶抗體的構成。
C.?閃現微量的免疫沉淀反響。
D.免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
ELISA試劑盒檢測中,進行各項試驗條件的挑選是很首要的,其間包括:
1)酶符號抗體作業濃度的挑選:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗系統里地滴定其作業濃度。
2)包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,央求純度要好,吸附時一般央求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不一樣的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相一同,查詢陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1~10μg/ml。
3)固相載體的挑選:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法能夠是凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反響,查詢其顯色反響是不是均一性,據此判明其吸附功用是不是超卓。

 


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