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技術文章

各種ELISA常用辦法的優勢下風比照

閱讀:127發布時間:2017-11-27

我們知道,ELISA試劑盒可分為多種類型測定,是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技能。
我公司技能部將各種ELISA常用辦法的優勢下風進行比照,成果如下:
一、直接法(direct Elisa)
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
1.優勢:操作手續簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。
2.下風:試驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。
二、間接法(indirect Elisa)
此測定辦法與直接法相似,不同在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
1.優勢:二抗能夠加強信號,并且有多種選擇能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它zui多的免疫反響性。
2.下風:交互反響發作的機率較高。
三、雙抗體夾心法(sandwich Elisa)
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選取,才可防止交互反響或競賽相同的抗原結合部位。
1.優勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。
2.下風:抗原必定得具有兩個以上的抗體結合部位。
四、競賽法(competitive Elisa)
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競賽相同的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經清洗過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只有固定抗原的對照組成果相比較,依據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。
1.優勢:可適用比較不純的樣本,并且數據再現性很高。
2.下風:全體的敏感性和專一性都較差。
五、ELISA試劑盒技能:根據細胞法(cell-based Elisa)
是一種新的定性蛋白檢測技能,將細胞直接在微孔板里培育,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經影響或抑制作用后的改變。
1.優勢:無需裂解細胞,所以目標蛋白丟失zui少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
2.下風:不能測定抗原量。
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